Przygotowanie i indukcja kultur Borrelia burgdorferi do produkcji cząstek wirusa
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:17 min. • September 26th, 2025
Zacznij od hodowli genetycznie zmodyfikowanego szczepu Borrelia burgdorferi, bakterii chorobotwórczej.
Szczep ten przenosi uśpione DNA bakteriofaga zintegrowane z jego genomem, który został zmodyfikowany tak, aby zawierał docelowy gen nadający oporność na antybiotyki.
Dodaj odpowiedni antybiotyk i inkubuj kulturę. Gen oporności na antybiotyki wyraża białko, które hamuje antybiotyk, zapewniając, że namnażają się tylko bakterie będące nosicielami genu.
Gdy kultura osiągnie pożądaną gęstość, odwirować komórki, aby je ogrunąć i wyrzucić supernatant.
Ponownie zawiesić osad, wprowadzić induktor chemiczny i inkubować, aby wywołać uszkodzenie DNA.
Powstała w ten sposób odpowiedź naprawcza DNA wycina DNA bakteriofaga, inicjując jego replikację, ekspresję białek strukturalnych i składanie nowych wirionów przenoszących gen oporności na antybiotyki.
Ponownie odwirować kulturę, wyrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w nowej pożywce.
Komórki bakteryjne zawierające dojrzałe wiriony są gotowe do dalszych zastosowań.
Zaszczepić 150 mikrolitrów odpowiedniego klonu Borrelia burgdorferi w 15 mililitrach BSK w szczelnie zamkniętych, sterylnych stożkowych probówkach wirówkowych do protokołu transdukcj
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych