Ocena roju bakterii za pomocą gradientowej płytki inhibitora

Weź gradientową płytkę roju z dwuwarstwowym agarem. Dolną warstwę, zawierającą inhibitor, wylano w celu wytworzenia gradientu inhibitora.

Płyta zawiera izometrycznie rozmieszczone studzienki, aby zapewnić odpowiednią przestrzeń dla roju bakterii lub migracji zbiorowej, zapobiegając nakładaniu się roju.

Zaszczep studzienki kulturą bakteryjną i inkubuj płytkę.

Przy niskich stężeniach inhibitorów bakterie koordynują swój ruch wiciowy, inicjując zbiorową migrację lub rój.

Przy wysokich stężeniach inhibitora inhibitor hamuje ekspresję genów związanych z wiciami.

Powoduje to ograniczony ruch wiciowców, co prowadzi do ograniczonej ruchliwości roju.

Sfotografuj płytę w białym świetle w regularnych odstępach czasu, aby uchwycić wzór roju.

Podczas obrazowania dostosuj czas ekspozycji, aby zwiększyć jasność rojów.

Zmodyfikuj ustawienia progu, aby zminimalizować zakłócenia światła tła i zwiększyć kontrast.

Zapisz obraz do późniejszej analizy wpływu stężenia inhibitora na roj bakterii.

Dodaj 80 mikrolitrów nocnej kultury wzrostu do każdej studzienki. Płytki roju należy wyjmować z inkubatora pojedynczo co 12 godzin i umieszczać je w systemie obrazowania żelu.

Wybierz tryb obrazowania żelowego, wystaw płytk