Mikrokalorymetria izotermiczna do monitorowania aktywności metabolicznej bakterii

Pobrać seryjne rozcieńczenia kultury bakteryjnej i dodać podwielokrotności do fiolek kalorymetrycznych zawierających pożywkę wzrostową.

Załadować szczelnie zamknięte fiolki do wielodołkowej płytki mikrokalorymetru izotermicznego w celu zmierzenia produkcji ciepła metabolicznego.

Urządzenie jest utrzymywane w stałej temperaturze, aby zapewnić, że wykryte ciepło pochodzi wyłącznie z metabolizmu bakteryjnego.

Gdy bakterie metabolizują składniki odżywcze i namnażają się, uwalniają ciepło, które czujniki wykrywają w czasie rzeczywistym.

Równolegle inkubować identyczne fiolki w inkubatorze. Za pomocą spektrofotometru zmierz gęstość optyczną (OD), aby monitorować wzrost bakterii.

Korzystając z sygnałów kalorymetrycznych z rozcieńczeń, skonstruuj krzywą aktywności termicznej i skoreluj ją z wartościami OD.

Ostry pierwszy szczyt wskazuje na oddychanie tlenowe podczas wykładniczego wzrostu.

Gdy tlen staje się ograniczony, komórki przechodzą w fermentację beztlenową, wytwarzając drugi ostry szczyt.

Po wejściu w fazę stacjonarną bakterie wydzielają enzymy, które rozkładają białka zewnątrzkomórkowe i podtrzymują metabolizm, wytwarzając szeroki pik.