Produkcja i osadzanie zarodników Bacillus subtilis w aerozolu

Zacznij od kultury Bacillus subtilis, wysoce odpornej bakterii tworzącej przetrwalniki.

Zaszczepić kulturę w pożywce o ograniczonej zawartości składników odżywczych i inkubować z napowietrzaniem w celu wywołania zarodnikowania.

Komórki zarodnikujące wytwarzają uśpione zarodniki z warstwami ochronnymi.

Przenieś kulturę do probówki i odwiruj, aby ogarnąć zarodniki. Usunąć supernatant zawierający pozostałe komórki i zanieczyszczenia.

Umyj granulki sterylną wodą destylowaną, powtórz wirowanie i ponownie zawieś zarodniki w sterylnej wodzie.

Za pomocą mikroskopu z kontrastem fazowym potwierdź czystość zarodników, identyfikując jasne zarodniki i sprawdzając brak zanieczyszczeń.

Wykonaj seryjne rozcieńczenia zarodników, umieść je na agarze odżywczym i inkubuj, aby umożliwić kiełkowanie żywotnych zarodników w koloniach. Policz kolonie, aby określić stężenie zarodników.

Na podstawie tego stężenia dostosuj ilość zarodników i załaduj rozcieńczoną próbkę do dyszy aerozolowej. Rozpyl go na sterylną szklaną powierzchnię, gdzie zawiesina szybko wysycha, tworząc cienką, jednolitą monowarstwę zarodników.

Aby przeprowadzić produkcję zarodników, przenieś 5 mililitrową kulturę na noc odpowiedniego szczepu B.su