Ekspresja białek bezkomórkowych przy użyciu ekstraktu z surowych komórek bakteryjnych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:32 min. • October 30th, 2025
Bezkomórkowy system ekspresji białek wykorzystuje bakteryjny surowy lizat komórkowy, który zawiera maszynerię molekularną niezbędną do transkrypcji i translacji in vitro.
Ten lizat obejmuje czynniki transkrypcyjne, rybosomy i transferowe RNA (tRNA).
Dodaj do lizatu mieszaninę zawierającą matrycę DNA, polimerazę RNA, nukleotydy i aminokwasy.
Przenieś go na płytkę PCR i odwiruj, aby zebrać płyn przyklejający się do ścianek. Uszczelnij płytkę, aby zapobiec parowaniu.
Inkubuj w termocyklerze w optymalnej temperaturze, aby wspomóc ekspresję białek bezkomórkowych.
Czynnik transkrypcyjny łączy się z polimerazą RNA, tworząc kompleks, który wiąże się z matrycą DNA.
Kompleks ten katalizuje syntezę RNA, włączając nukleotydy w celu wytworzenia informacyjnego RNA (mRNA).
mRNA rekrutuje rybosomy, które inicjują translację, podczas której tRNA dostarczają odpowiednie aminokwasy, tworząc łańcuch polipeptydowy.
Polipeptyd składa się w funkcjonalne białko, gotowe do dalszych zastosowań.
Aby przeprowadzić ekspresję białka bezkomórkowego za pomocą matrycy DNA, rozmrozić 10-krotną mieszankę wzorcową roztworu energetycznego, 4-krotną podwielokrotność głównej mieszanki aminokwasów i matrycę DNA w temperaturze pok
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych