Monitorowanie wzrostu bakterii w czasie rzeczywistym za pomocą mikroprzepływowego systemu hodowli mikrokropelek

Zacznij od komory do hodowli mikrokropelek zawierającej chip mikroprzepływowy ze złączami sterowanymi pompą do przepływu płynu i usuwania odpadów.

Umieść w komorze butelkę z odczynnikiem zawierającą zawiesinę bakteryjną pokrytą olejem.

Podłącz górną rurkę butelki do portu pompy, a rurkę boczną do złącza chipowego. Zamknij komorę.

Ustaw parametry krzywej wzrostu. Następnie zainicjuj wytwarzanie kropel.

Gdy zawiesina olejowa i bakteryjna zbiegają się na skrzyżowaniu T, ścinanie oleju rozbija wodną fazę bakteryjną na jednolite, otaczające bakterie mikrokropelki.

Po wytworzeniu kropelki wyjmij butelkę, podłącz złącze chipa do portu pompy i zamknij komorę.

Gdy każda kropla przechodzi przez ścieżkę detekcji, sonda światłowodowa mierzy jej gęstość optyczną, reprezentując stężenie bakterii.

Przesuwaj mikrokropelki do przodu i do tyłu, aby umożliwić rozwój bakterii.

Z biegiem czasu światłowód mierzy gęstość optyczną kropli, generując krzywą wzrostu.

Użyj sterylnej strzykawki o pojemności 10 mililitrów, aby wstrzyknąć od trzech do pięciu mililitrów oleju MMC z igły strzykawki do bocznej rurki do butelki z odczynnikiem. Następnie powoli przechylaj i obracaj butelkę z odczynnikiem, aby olej w pełni przeniknął do wewnętrznej ścianki.

Po wstrzyknięciu pięciu mililitrów początkowego roztworu bakteryjnego do butelki, napełnij butelkę z odczynnikiem, wstrzykując od pięciu do siedmiu mililitrów oleju MMC. Wyciągnij niezależne szybkozłącze A z butelki z odczynnikiem i włóż szybkozłącze A do szybkozłącza B butelki, aby zakończyć operację wstrzykiwania próbki. Po zakończeniu otwórz drzwi komory operacyjnej, aby włożyć butelkę z odczynnikiem do metalowej kąpieli.

Wyciągnij złącze C2 chipa i szybkozłącze A butelki z odczynnikiem. Podłącz boczne złącze rurki butelki z odczynnikiem do złącza C2, a złącze górnej rurki do złącza O2. Następnie zamknij drzwi komory operacyjnej.

Aby wybrać funkcję pomiaru krzywej wzrostu, kliknij na Krzywa wzrostu. W interfejsie ustawiania parametrów wprowadź liczbę jako 15. Następnie włącz przełącznik wykrywania OD i ustaw długość fali na 600 nanometrów. Kliknij kartę Start, aby rozpocząć generowanie kropel.

Proces zajmie 15 minut.

Gdy na głównym interfejsie pojawi się wyskakujące okienko z komunikatem, otwórz drzwi komory operacyjnej, aby wyjąć butelkę z odczynnikiem i podłączyć złącza C2 i O2. Po zamknięciu drzwi kliknij przycisk OK w wyskakującym okienku, aby automatycznie wyhodować kropelki i wykryć wartości OD.

Gdy krzywa wzrostu osiągnie fazę stacjonarną, kliknij przycisk Eksport danych , aby wyeksportować dane OD. Wybierz ścieżkę zapisu danych i wyeksportuj wartość OD zarejestrowaną w okresie uprawy w formacie kropkowym CVS. Aby wykreślić krzywą wzrostu, użyj oprogramowania do mapowania, takiego jak Excel i Origin 9.0.