Ruchliwość ślizgowa we włóknach Phormidium lacuna

Zacznij od kultury włókien Phormidium lacuna .

Krótko homogenizuj kulturę, aby rozbić skupiska włókien i wytworzyć jednolitą zawiesinę.

Przenieść homogenizowaną próbkę na płytkę Petriego i pozostawić do spoczynku.

Przykryj talerz celofanem, aby zmniejszyć parowanie.

Umieść szkiełko na stoliku mikroskopu, aby służyło jako platforma podpierająca.

Umieścić płytkę zawierającą próbkę bezpośrednio na szkiełku.

Użyj soczewki obiektywowej o małej mocy i skup się na włóknach bakteryjnych zawieszonych w podłożu, aby obserwować ich ruch.

Włókna wykazują powolny, ślizgający się ruch po powierzchni, napędzany przez pili typu IV - mikroskopijne włókna zebrane na błonie wewnętrznej i wyłaniające się przez błonę zewnętrzną.

Włókna te rozciągają się i chowają, aby pociągnąć komórki do przodu, umożliwiając im ślizganie się.

Test ten ujawnia charakterystyczną ruchliwość ślizgową Phormidium lacuna w środowisku ciekłym.

Hoduj P. lacuna w podłożu F2 pod 50 obr./min mieszanie poziome w białym świetle przez około pięć dni, aż szacowana gęstość optyczna przy 750 nanometrach stanie się 0,35. Przechowywać próbkę w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Homogenizować włókna za pomocą ultradźwięków przez jedną minutę przy maksymalnej mocy i cyklu jednego.

Zmierz gęstość optyczną na 750 nanometrach i przenieś osiem mililitrów pożywki zawierającej P. lacuna na sześciocentymetrową szalkę Petriego. Odczekać kilka minut, aż próbka osiągnie temperaturę pokojową, a następnie przykryć szalkę Petriego folią celofanową. Umieść szkiełko mikroskopowe na stole X-Y standardowego mikroskopu z kamerą.

Włącz światło mikroskopu i przesuń obiektyw 4X lub 10X w kierunku ścieżki światła. Następnie umieść szalkę Petriego na szkiełku. Dostosuj pojedyncze filamenty lub wiązki filamentów za pomocą ruchów X, Y i Z tabeli.

Obserwuj ruchy pojedynczych włókien lub wiązek i rejestruj je za pomocą standardowej kamery mikroskopowej. Upewnij się, że soczewka obiektywu nie dotyka cieczy.