JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:52 min. • November 28th, 2025
Weź mikropłytkę wypełnioną podłożem odżywczym zawierającym manitol.
Każdą jamkę zaszczepić bakterią produkującą celulozę i inkubować w warunkach statycznych.
Podczas inkubacji bakterie pobierają mannitol i metabolizują go do glukozy.
Glukoza ta jest transportowana do kompleksów syntaz celulozowych osadzonych w błonie bakteryjnej i polimeryzuje się do łańcuchów glukanowych.
Łańcuchy te wyciągają się do przestrzeni zewnątrzkomórkowej, gdzie krystalizują się w mikrofibryle.
Mikrofibryle wiązają się w struktury przypominające wstęgę, tworząc trójwymiarową macierz nanocelulozy.
W miarę jak powstaje coraz więcej nanocelulozy, gromadzi się ona na granicy powietrze-ciecz, zagęszczając się w galaretowate pellicle uformowane w kształt studni.
Pobierz pellicle i inkubuj je w roztworze zasadowym, aby zlikwidować komórki bakteryjne, a następnie usuń pozostałe medium.
Płucz pellicle wielokrotnie wodą, aby wyeliminować pozostałe roztwór zasadowy. Przechowuj pellicle w wodzie, aby zapobiec odwodnieniu. Następnie sterylizuj je parą, aby zapewnić bezpłodność do dalszych zastosowań.
Przełóż dwa mililitry płynnego medium do każdej dołki na 24-dołkowej płytce do hodowli tkankowej. Dwie kolonie z igłą inokulującą z zaszczepionych szalek Petriego w kroku umieszczaj je w pierwszej jamce płytki do hodowli tkankowej. Powtórz ten sam zabieg dla pozostałych 23 otworów.
Inkubuj płytkę do hodowli tkanek w temperaturze 30 stopni Celsjusza przez siedem dni. Daje to łącznie 24 pellicle BNC o średnicy 16 mm i grubości około 2 do 3 mm. Pobierz pellicle BNC z podłoża i sterylizuj je w 200 mililitrach jednoprocentowego wodorotlenku sodu przez godzinę w temperaturze 50 stopni Celsjusza, aby usunąć wszelkie ślady G. xylinus.
Usuń roztwór i dodaj 200 mililitrów świeżo przygotowanego jednoprocentowego wodorotlenku sodu. Powtarzaj ten sam proces raz lub aż pellicle BNC w roztworze nabiorą przezroczystego wyglądu. Przepłucz pellicle BNC wodą trzy razy i przechowuj je w wodzie o wysokiej czystości w temperaturze pokojowej.
Upewnij się, że pelikule BNC są całkowicie zanurzone w wodzie i nie mogą w żadnym momencie wyschnąć. Następnie autoklawuj pellicle BNC w temperaturze 121 stopni Celsjusza przez 20 minut.