Śledzenie wzrostu bakterii z rozdzielczością pojedynczych komórek w układzie mikrofluidowym

Zacznij od urządzenia mikrofluidycznego zamontowanego na scenie odwróconego mikroskopu fluorescencyjnego.

Urządzenie składa się z polimerowego chipu wyposażonego w poziome kanały podawania. Każdy kanał jest wyłożony serią wąskich rowów uszczelnionych na jednym końcu i zaprojektowanych tak, by uwięzić komórki bakteryjne w łańcuchach liniowych.

W rowach znajdują się nieruchome komórki bakteryjne, które ekspresują fluorescencyjne białko, umożliwiające ich wizualizację.

Każdy kanał podawający jest podłączony do pomp strzykawkowych, które dostarczają podłoże bogate w składniki odżywcze z kontrolowanym przepływem.

Inicjuj przepływ, aby medium mogło się rozprosić do rowów i wspierać wzrost bakterii.

Zamknięte komórki bakteryjne dzielą się wewnątrz rowu, tworząc łańcuch potomstwa.

Projekt rowu zapewnia, że nowsze komórki na otwartym końcu są zmywane, umożliwiając długoterminowe śledzenie najstarszych komórek.

Rejestruj obrazy rowów w czasie, aby śledzić wzrost i podział poszczególnych komórek bakteryjnych.

Ostrożnie zamontuj załadowane urządzenie na wkładce sceniczne, przyklejając szyby osłonowe po obu stronach PDMS do dolnej części wkładu scenicznego. Odwróć zespół wkładki scenicznej tak, aby PDM