Monitorowanie wzrostu bakterii w różnych formułach ośrodka za pomocą zautomatyzowanego mikrobioreaktora

Weź hodowlę genetycznie modyfikowanej bakterii zaprojektowanej tak, by zawierała plazmid ekspresujący wydzielniczy fluorescencyjne białko i zapewniający oporność na antybiotyki.

Zaszczep go w podłożu zawierającym antybiotyk i inkubuj poprzez potrząsanie, aby wspierać wzrost bakterii.

Antybiotyk zapewnia, że tylko komórki zachowujące plazmid mogą się rozmnażać.

Gdy hodowla osiągnie pożądaną gęstość, należy ją przenieść do zautomatyzowanego systemu obsługi cieczy.

Płytka głęboko-dołkowa zawiera różne stężenia niezbędnych składników odżywczych, które są podawane do mikromiareczki, aby uzyskać odrębne formuły podłoża.

Zaszczep każdą dołek płyty hodowlą bakteryjną.

Uszczelnij płytę i umieść ją w mikrobioreaktorze, który utrzymuje równomierną temperaturę i napowietrzanie.

Różne formuły prowadzą do różnic w wzroście bakterii i wydzielaniu białek fluorescencyjnej.

Czujnik optyczny w urządzeniu mierzy gęstość komórek i fluorescencję, umożliwiając porównanie wzrostu bakterii i produkcji białek fluorescencyjnej w różnych formułach ośrodka.

Sterylizuj płytki głębokie do przechowywania roztworu na stole roboczym, przecierając płytki 70% etanolem, a następnie susząc je w laminarnym okapu. Rozpocznij hodowlę nasion od zaszczepienia 50 mililitrów podłoża BHI zawierającego 25 miligramów na litr kanamycyny, z jedną aliquotą z działającego banku komórek. Umieść wszystkie niezbędne przybory laboratoryjne na robotycznym stole roboczym i wlej roztwory wywarowe do odpowiednich zaczyń.

Następnie rozpocznij robotyczny proces przygotowania podłoża, aby ostatni krok, czyli szczepienie, został osiągnięty na czas przed rozpoczęciem hodowli nasion. Pobierz próbkę z hodowli nasion po około dwóch godzinach, aby monitorować wzrost, mierząc gęstość optyczną na 600 nanometrów lub OD₆₀₀. Monitoruj wzrost co godzinę.

Po około pięciu godzinach hodowla osiąga przedawkowanie₆₀₀ między trzecią a czwartą godziną i służy do szczepienia głównych kultur. Umieść kulturę nasion na stole do obsługi płynu i kontynuuj protokół przygotowania media. Po inokulacji zabezpiecz mikromiatniki uprawy.

Następnie umieść uszczelniony MTP do uprawy w urządzeniu Biolector. Następnie rozpocznij zdefiniowany protokół kultywacji.