Dostarczanie w aerozoli Mycobacterium tuberculosis w leczeniu infekcji płuc w modelu mysim

Zacznij od zamrożonego zapasu Mycobacterium tuberculosis, patogennej bakterii wywołującej gruźlicę płuc.

Rozmroź fiolkę i delikatnie wymieszaj zawiesinę, aby rozproszyć grudki bakterii i zapewnić jednolite stężenie.

Rozcieńcz wymaganą objętość w buforze sterylnym, aby przygotować standaryzowane inokulum aerozolu.

Unieruchom mysz w uchwycie siatki, aby ograniczyć ruch, i umieść ją w szczelnej komorze aerozolu.

Załaduj przygotowane inokulum do strzykawki i wstrzykuj je do jednostki nebulizatora podłączonej do komory.

Aktywuj system wdechowy, który wykorzystuje sprężone powietrze do rozpylania zawiesiny na drobne, oddychalne krople.

Krople te, zawierające żywotną M. tuberculosis, rozpraszają się do powietrza w komorze.

Świadoma mysz wdycha aerozol, co pozwala żywotnym bakteriom przeniknąć głęboko do płuc i zainicjować infekcję.

Model myszy gruźlicy płuc jest już gotowy do dalszych badań.

Zacznij od ogrzania zapasów Mycobacterium tuberculosis o znanym miaczniku CFU. Po rozmrożnięciu komórek użyj strzykawki 1 mililitra wyposażonej w igłę o grubości 27 gauge, aby ostrożnie wymieszać zawiesinę pięć razy, aby rozproszyć grudki bakterii, unikając powstawania aerozoli. W zależności od pożądanej dawki infekcji, przenieś wymaganą objętość zapasu mykobakterialnego do probówki 50 mililitrów zawierającej jałowy PBS do końcowej objętości 6 mililitrów. Następnie umieść zwierzęta eksperymentalne poszczególno w koszach z siatką na przedziałkach. Włóż kosze do okrągłej komory aerozoli i zamknij pokrywę komory.

Przymocuj jednostkę nebulizatora Venturiego do trzech stawów nasadek ze stali nierdzewnej. Aspiracja grzybniczej zawiesiny do strzykawki 10 mililitrów, wyposażona w igłę 18-gauge, i przenieś strzykawkę do komory aerozolu w zamkniętej skrzynce transportowej. Teraz zdejmij nakrętkę nebulizatora i ostrożnie wstrzykni zawiesinę mykobakterii do urządzenia, uważając, by nie generować się aerozoli.

Wyrzuć strzykawkę do pojemnika na ostre środki zawierające 2% Buratonu, a następnie zamknąć nebulizator.

Włącz aparat wdechowy.

Po zakończeniu cyklu potwierdzić, że zawieszenie mykobakterii zostało całkowicie zniebulizowane.