Modelowanie infekcji u noworodkowych myszy z użyciem kapsulowanych bioluminescencyjnych bakterii

Zacznij od noworodkowych myszy w odpowiednim wieku.

Delikatnie podnieś skórę z tyłu szyi każdego szczeniaka. Podskórnie podaj jednemu młodemu zawiesina bakterii patogennych o niskim stężeniu, a drugiemu zawiesina o wysokim stężeniu.

Bakterie te wykazują bioluminescencyjny operon, który produkuje enzym lucyferazy i jego podłoże, umożliwiając autonomiczną emisję światła.

Ochronna kapsułka polisacharydowa otacza bakterie i maskuje ich powierzchniowe antygeny, uniemożliwiając rozpoznanie przez komórki odpornościowe młodych.

Oddaj młode biologicznej matce na opiekę poporodową.

Proliferacja bakterii w miejscu wkłucia wywołuje stan zapalny i zwiększa przepuszczalność naczyń, umożliwiając przedostanie się bakterii do krwiobiegu i rozprzestrzenianie się systemów.

Umieść znieczulone szczenięta pod systemem luminescencji.

Lucyferaza utlenia podłoże, aby uzyskać światło widzialne, umożliwiając wizualizację obecności bakterii wewnątrz młodych.

Rejestruj obrazy w czasie, aby porównać wzrost i rozprzestrzenianie się bakterii u młodych zaszczepionych wysokim i niskim stężeniem bakterii.

Zacznij od umieszczenia szczeniąt dopasowanych w wieku do grup miotów o wysokiej lub niskiej dawce w szafce o poziomie bezpieczeństwa biologicznego drugiego. W trzecim lub czwartym dniu poporodowym zapisz wagę wszystkich młodych przed szczepieniem.

Ładuj strzykawki insulinowe PBS lub wysoką lub niską dawkę E. Szczepić szczepionkę Coli Lux do szafki na zabezpieczenie biologiczne i umieścić załadowane strzykawki na lodzie.

Umieść noworodka do wstrzyknięcia na czystej powierzchni w szafce zabezpieczeń biologicznych i unieś skórę na karku, jakby chciał psa podrapać za kark. Włóż fazę igły tuż pod skórę, w przestrzeń między skórą a mięśniem. Gdy igła jest wyczuwalna pod skórą, wstrzyknij 50 mikrolitrów inokulantu, jednocześnie uwalniając ściśniętą część skóry, aby zapobiec cofaniu się. Następnie powoli i ostrożnie wyjmij igłę.

Gdy wszystkie młode zostaną wstrzyknięte w ten sam sposób, odłóż je do mat. Bezpośrednio po wstrzyknięciu i w odpowiednich momentach eksperymentalnych umieść klatkę razem z E. Coli Lux zakażone noworodkami i tamą do okapu o laminarnym przepływie na poziomie biosafety dwa, a oprogramowanie w komputerze mikrokomputerowej CT otwierają oprogramowanie. Po inicjalizacji systemu i oczekiwaniu na zablokowanie temperatury stopnia na 37 stopni Celsjusza oraz zablokowania temperatury CCD na minus 90 stopni Celsjusza, umieść do czterech znieczulonych pupów na skrzynce obrazującej w komorze obrazowania w pozycji leżącej.

Zamknij drzwi komory obrazowania i wybierz opcję luminescencyjnego obrazowania. Wybierz filtr otwarty i następny, ustaw filtr wzbudzenia na blok i filtr emisyjny na otwarty. Wybierz 500, 520, 560, 580, 600 i 620 nanometrów.

Następnie zrób zdjęcia szczeniąt przed powrotem do klatki z matką, obserwując je do czasu rekonwalescencji znieczulenia.