JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:03 min. • February 2nd, 2026
Rozpocznij od hodowli Agrobacterium tumefaciens uprawianej w podłożu, uzupełnionej dwoma antybiotykami, aby zapobiec zanieczyszczeniu i zapewnić zatrzymanie plazmidów.
Bakterie zawierają wektor ekspresji roślin niosący interesujący gen oraz gen oporności na antybiotyki.
Zawierają także plazmid pomocniczy z obszarem genów zjadliwości niezbędnym do dostarczania interesującego genu do komórek roślinnych.
Przelej część do probówki zawierającej buforowane medium wzbogacone acetosyringonem, cząsteczką sygnałową pochodzącą z roślin, oraz antybiotykami. Inkubuj z drżeniem.
Acetosyringon dyfunduje do komórki, uruchamia szlak sygnalizacyjny i aktywuje ekspresję genów zjadliwości niezbędnych do transferu interesującego genu.
Przenieś hodowlę, rozwinąć w wirówce, aby zebrać bakterie, i wyrzuć supernatant.
Dodaj bufor soli i wielokrotnie myj komórki, aby usunąć dodatkowe antybiotyki.
Ponownie zawiesij bakterie w buforze za pomocą acetosyringonu i inkubuj bez potrząsania, aby utrzymać ekspresję genów zjadliwości.
Natychmiast wykorzystaj kulturę dla efektywnej transformacji.
Użyj końcówki, aby pobrać dodatnią kolonię z płytki LB i zaszczepić komórki w szklanej probówce zawierającej 5 mililitrów medium LB,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych