Przygotowanie tkanek pęcherza myszy do wizualizacji infekcji bakteryjnej

Zacznij od uśpionej myszy z odsłoniętym pęcherzem, wcześniej zainfekowaną bakteriami patogennymi.

Bakterie wnikają do urotelu i tworzą kolonie. Po dojrzewaniu bakterie te przerywają komórkę nabłonkową i infekują otaczające komórki.

Wkładam cewnik podłączony do strzykawki wypełnionej utrwalaczem. Powoli wprowadzaj utrwalacz, aby nadmuchać pęcherz i zachować jego architekturę.

Zacisnąć cewkę moczową, aby zatrzymać utrwalacz i utrzymać kształt pęcherza.

Usuń cewnik, a potem przetnij cewkę moczową. Przełóż pęcherz na nowy utrwalacz i inkubuj, aby zachować strukturę.

Przedziel pęcherz na dwa półpęcherze kubków, aby odsłonić urothelium, i przepłucz buforem.

Bejcuj odczynnikiem na bazie metalu, aby poprawić kontrast, a następnie myj ultraczystą wodą.

Odwodnić odcinki za pomocą gradientu etanolowego, a następnie suszyć w punkcie krytycznym.

Przetnij każdy wysuszony kubek na pół.

Próbka jest już gotowa do dalszego przetwarzania w celu wizualizacji interakcji gospodarz-patogen.

Po umieszczeniu strzykawki z gruźlicy z utrwalaczem przymocuj cewnik na końcówkę, skośnie skierowaną naprzeciwko oznaczeń strzykawki.

Odetnij nadmiar rurki 1 do 2 milimetrów od końca igły, uważając, by nie odsłaniać końcówki igł