Przygotowanie hodowli gronkowca aureusa hemolitycznego do badań interakcji gospodarz z patogenem

Zacznij od selektywnej płytki agarowej uzupełnionej krwinkami zawierającymi krwinki.

Pas Staphylococcus aureus (S.aureus), patogenna bakteria Gram-dodatnia, na agarze i inkubuj.

Podczas inkubacji bakterie wykorzystują składniki odżywcze, rosną i tworzą kolonie.

S. aureus wydziela hemolizynę, toksynę tworzącą pory, która rozpuszcza erytronetki w agarze i tworzy przezroczyste, przezroczyste strefy wokół kolonii, wskazujące na hemolizę.

Wybierz kolonię hemolityczną, zaszczep ją w bulionie odżywczym i inkubuj w warunkach rotacyjnych, aby wspierać wzrost bakterii.

Za pomocą spektrofotometru zmierz gęstość optyczną (OD) w celu określenia stężenia bakterii.

Na podstawie odczytu przedawkowania przelej aliquotę do świeżego, odżywczego bulionu, aby rozcieńczyć komórki, i inkubuj w kąpieli wodnej z potrząsaniem.

Mierz przedawkowanie w regularnych odstępach.

OD bliski 0,8 wskazuje, że bakterie osiągnęły fazę wzrostu wykładniczego z jednolitą fizjologią.

Ten hemolityczny S. aureus jest gotowy do badań interakcji gospodarz-patogen.

Zacznij od przesuwania S. Szczepy aureus są interesujące na płytkach agaru z krwi z zamrożonego zapasu glicerolu i inkubują płytki w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 16 do 24 godzin, aby potwierdzić ich hemolityczne fenotypy na podstawie zdolności do lizy czerwonych krwinek i tworzenia przezroczystych stref.

Zaszczepić izolatki pojedynczej kolonii każdego szczepu w 4 mililitrach tryptycznego bulionu sojowego, czyli TSB, w sterylnych szklanych tubach i obracać rurki w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 16 do 24 godzin w rolce rurkowej pod kątem około 70 stopni i 70 obrotów na minutę. Następnego ranka zmierz gęstość optyczną na 600 nanometrów, czyli OD₆₀₀, hodowli na spektrofotometrze i rozcieńcz komórki do OD₆₀₀ 0,05 w 25 mililitrach sterylnego TSB w stosunku 5 do 1 kolby do objętości w kolbach DeLong o pojemności 125 mililitrów. Inkubuj hodowle w kąpieli wodnej o temperaturze 37 stopni Celsjusza z prędkością 280 obrotów na minutę.