JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 1:18 min. • January 30th, 2026
Zacznij od posiewki biosensorowej bakteryjnej zawieszonej w podłożu.
Te inżynieryjne bakterie produkują czynnik transkrypcyjny, który po wiązaniu się z konkretnym metabolitem kału aktywuje promotor powiązany z fluorescencyjnym genem reportera.
Do tej hodowli dodaj przefiltrowaną próbkę ludzkiego kału zawierającą metabolity, takie jak mleczan, które uczestniczą w interakcjach gospodarz-mikrobiom.
Rozcieńcz tę mieszaninę świeżym medium, aby utrzymać optymalną objętość reakcji.
Inkubuj bez drgania, aby naśladować środowisko ludzkich jelit.
Metabolity kałowe dyfundują się do komórki bakteryjnej i wiążą się z czynnikiem transkrypcyjnym.
Ten kompleks wiąże się z promotorem i prowadzi do ekspresji genów reporterowych oraz produkcji białek.
Wymieszaj roztwór dla równomiernego rozkładu, rozcieńcz go w buforze i analizuj za pomocą cytometrii przepływowej.
Gdy komórki bakteryjne przechodzą przez laser, fluorescencja emitowana przez białka reporterowe potwierdza obecność konkretnego metabolitu kałowego.