JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 1:29 min. • February 26th, 2026
Zacznij od hodowli komórek odpornościowych zakażonych patogennymi bakteriami, które tworzą wewnątrzkomórkowe ciała inkluzyjne.
Infekcja bakteryjna upośledza szlak prezentacji antygenów w komórkach odpornościowych.
Weź niezainfekowaną kulturę jako kontrolę.
Następnie dodaj antygen białka modelowego i inkubuj.
Komórki odpornościowe internalizują, przetwarzają i prezentują modelowe peptydy pochodzące z antygenu na cząsteczkach MHC-I.
Po inkubacji umyj komórki, aby usunąć nieprzetworzony antygen.
Utrwal komórki, a następnie dodał środek hartujący, aby zneutralizować utrwalający.
Wprowadź inżynieryjne komórki T CD8+ i inkubuj.
Komórki te rozpoznają fragment antygenu wyświetlany na cząsteczce MHC-I, zostają aktywowane i wydzielają enzym pełniący rolę markera prezentacji antygenu pośredniczonego przez MHC-I.
Następnie dodaj podłoże, które reaguje z enzymem, aby wytworzyć sygnał kolorymetryczny.
Zmierz absorpcję. Zmniejszona absorpcja w zakażonej hodowli komórek w porównaniu do niezakażonej hodowli wskazuje na pogorszenie efektywności prezentacji antygenów MHC-I spowodowaną infekcją bakteryjną.