JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:12 min • February 26th, 2026
Zacznij od bogatej w składniki odżywcze płytki podłoża nicieni, zawierającej trawnik patogennej bakterii Aeromonas.
Przenieś robaki C. elegans w stopniu L4 ekspresujące specyficzne dla mięśni GFP na trawnik bakteryjny i inkubuj.
Robaki spożywają bakterie wraz z składnikami odżywczymi. Pozwala to bakteriom dotrzeć do jelita i go skolonizować.
Wykorzystując specjalistyczny system wydzielania, Aeromonas dostarcza czynniki zjadliwości do komórek jelit robaka.
Te czynniki zjadliwości rozprzestrzeniają się do ściany ciała, gdzie utrudniają mięśnie, powodując uszkodzenia strukturalne i martwicę.
Przenosi robaki codziennie na świeżą płytkę z bakteryjnym trawnikiem, aby utrzymać ciągłą ekspozycję na patogeny.
Umieść robaki na żelu agarozowym uzupełnionym środkiem znieczulającym w celu znieczulenia, a następnie załóż pokrywkę.
Używając filtra GFP, rejestruj obrazy fluorescencji w regularnych odstępach czasu.
Postępująca utrata sygnału GFP wskazuje na zaburzenia mięśni u C. elegans, co oznacza martwicę mięśni wywołaną przez Aeromonas podczas interakcji gospodarz z patogenem.
Po hodowli szczepów Aeromonas i dostosowaniu absorpcji zgodnie z protokołem tekstowym, rozprowadź bulion bakteryjny na płytkach NGM.
Następnie przenieś 50 robaków L4 na każdą płytę NGM. Co 24 godziny przenosi się robaki na świeże płytki NGM. Losowo wybierz 10 robaków i przelej je do żelu agarozowego 2% w medium M9 na szkiełce.
Na koniec umieść pokrywkę na żelu i rejestruj obrazy mięśni za pomocą zielonego fluorescencyjnego filtra białkowego na mikroskopie fluorescencyjnym wyposażonym w aparat.