Kolonizacja jelit i indukowanie biegunki przez Vibrio cholerae u dorosłych danio

Umieść dorosłe danio w sterylnej wodzie infekcyjnej i dodaj patogenny szczep Vibrio cholerae o pożądanej gęstości.

Przykryj zlewkę perforowaną pokrywką, aby ryba nie wyskoczyła i nie wysiadała się inkubować.

Danio dano popycha bakterie, które docierają do jelit, przesuwają się przez warstwę śluzu za pomocą wici i przyczepiają się do nabłonka.

Kolonizują nabłonek i wydzielają toksyny, które zaburzają integralność jelit, prowadząc do wycieku jonów, płynów i białek.

Toksyny te wywołują także wydzielanie nabłonkowego śluzu, co sprzyja trwałości bakterii.

Nagromadzenie płynów, śluzu i zawartości jelit powoduje wodnistą biegunkę, którą można wykryć po zwiększonej mętności wody.

Po wysybaniu zbierz ryby i wylej zainfekowaną wodę do środka dezynfekującego.

Przenieś rybę do wody sterylnej, aby usunąć bakterie powierzchniowe.

Zbierz i ponownie przenieś ryby do wody sterylnej do dalszej analizy.

Po przygotowaniu kultur V. cholerae zaszczep danio danio przez zanurzenie. Najpierw umieść cztery lub pięć danio pręgowanych do zlewki o pojemności 400 mililitrów zawierającej 200 mililitrów sterylnej wody zakaźnej. Następnie dodaj 1 mililitr hodowli V. cholerae dla pożądanego stężenia infekcji.

Następnie przykryj zlewkę perforowaną pokrywką. Po przygotowaniu wszystkich zlewek przełóż je do szklanego inkubatora ustawionego na 28 stopni Celsjusza. W przypadku ekspozycji przejściowej, po około sześciu godzinach wylej wodę z kubka przez siatkę rybacką, aby zebrać ryby. Zainfekowana woda musi być wydzielana do wybielacza, aby zabić bakterie.

Następnie umieść rybę w 200 mililitrach sterylnej wody zakażeniowej na pięć minut. Po pięciu minutach przeprowadź tę wodę przez kabarkę, wyrzucając wodę do wybielacza. Teraz ryby mogą trafić do nowego, czystego zlewka z 200 mililitrami sterylnej wody zakaźnej.