JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:51 min • March 31st, 2026
Sprawdź szczep G. vaginalis, odporny na antybiotyki, beztlenową bakterię związaną z infekcjami dróg moczowych u myszy.
Podczas początkowego zakażenia pęcherza uropatogeniczna E. coli tworzy rezerwuary spoczynkowe w komórkach nabłonka pęcherza.
Późniejsza ekspozycja na G. vaginalis wywołuje toksynowe usuwanie komórek powierzchownych, co pozwala na ponowne pojawienie się uśpionego UPEC i wywołanie nawracających infekcji dróg moczowych.
Aby przygotować szczepionkę G. vaginalis , nanieś wywar na płytkę z agarem odżywczym bez antybiotyków, aby umożliwić regenerację bakterii.
Inkubować beztlenowo, aby uzyskać aktywnie rosnące kolonie.
Przelej pętlę gęstych kolonii do bulionu odżywczego bez antybiotyków.
Inkubować statycznie w warunkach beztlenowych aż do osiągnięcia pożądanego stężenia bakterii.
Zmierz gęstość optyczną, aby oszacować stężenie.
Przelej zawiesinę do rurki, rozwinę w wirówce, aby rozpylić bakterie, wyrzuć supernatant i ponownie zawiesić w buforze.
Przygotowuj seryjne rozcieńczenia i podawaj je na podłoże zawierające antybiotyki, aby umożliwić selektywny wzrost G. vaginalis i zapobiec zakażeniu. Policz kolonie, aby określić stężenie inokulum.
Zacznij od przejazdu G. Napięcie pochwy z zamrażarki o temperaturze minus 80 stopni Celsjusza do komory beztlenowej. Rozmazuj bakterie na płytce NYCIII bez antybiotyków. Inkubuj płytkę beztlenowo w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 24 godziny.
W komorze beztlenowej zaszczepić pięć mililitrów beztlenowego podłoża NYCIII w pętli o pojemności jednego mikrolitra wypełnioną komórkami z płyty NYCIII i inkubować hodowlę statycznie w temperaturze 37 stopni Celsjusza w warunkach beztlenowych przez 18 godzin. Nie włączaj antybiotyków do podłoża wzrostowego. Określ OD600 hodowli za pomocą spektrofotometru.
Następnie wiruj go w 9 600 g przez minutę i aspiruj medium. Ponownie zawiesij granulat bakteryjny w PBS do pożądanego stężenia i stopniowo rozcieńczaj oraz nakładaj inokulum na płytkę.