JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:54 min. • February 26th, 2026
Weź znieczulone dzikie danio dano i danio pręgowane immunosłabione, które nie mają limfocytów.
Umieść każdą rybę brzuszną stroną do góry w szczelinie wyrzeźbionej w wilgotnej gąbce, aby zachować żywotność.
Wstrzyknięcie Mycobacterium marinum do jamy brzusznej, aby ustalić infekcję ogólnoustrojową modelującą gruźlicę człowieka.
Po wstrzyknięciu przełóż ryby do wody ze słodkim akwarium w celu rekonwalescencji i monitoruj je.
U dzikich ryb odpowiedź zapalna tworzy ziarniniaka złożonego z bakterii, zakażonych makrofagów i limfocytów. Ziarniak zawiera bakterie, zapobiegając ich rozprzestrzenianiu się.
Limfocyty wydzielają cytokiny, które wzmacniają działanie makrofagów przeciwdrobnoustrojowe, umożliwiając zabijanie bakterii.
U ryb z obniżoną odpornością ziarniak nie posiada limfocytów. W rezultacie makrofagi pozostają częściowo aktywowane, co pozwala bakteriom przetrwać, rozmnażać się i rozprzestrzeniać się, co prowadzi do śmiertelności ryb.
Wygeneruj wykres przetrwania. Wysoka śmiertelność u ryb z obniżoną odpornością podkreśla rolę limfocytów w kontrolowaniu infekcji.
Najpierw pipetować 5-litrową kroplę rozcieńczonego roztworu bakteryjnego na kawałek folii parafinowej. Następnie wciągnij kroplę do igły insulinowej o grubości 30 gauge.
Do tego eksperymentu użyj ryby w wieku pięciu do ośmiu miesięcy, z którą jedna będzie dziką rybą, a drugą szmacianą mutantką. Umieść ryby brzuszną stroną do góry w szczelinach kawałka wilgotnego, piankowego plastiku. Wstrzyknij igłę insulinową między płetwy miednicy pod kątem 45 stopni.
Trzymaj igłę otwartą do góry, aby cały otwór znajdował się wewnątrz jamy brzusznej. Następnie powoli wstrzykuj roztwór bakteryjny. Następnie ostrożnie wyjmij igłę i natychmiast przelej ryby do zbiornika regeneracyjnego wypełnionego świeżą wodą.
Pobieraj próbki z bakterii używanej co 15 minut na płytkach 7H10. Inkubuj te próbki w temperaturze 29 stopni Celsjusza przez pięć dni, aby zweryfikować dawkę infekcji. Regularnie sprawdzaj stan zdrowia ryb, upewniając się, że uśpiasz każdą rybę z objawami infekcji poprzez inkubację w wodzie zawierającej więcej niż 0,02% etylesteru kwasu 3-aminobenzoenowego (3-aminobenzoe).