JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:47 min. • March 31st, 2026
Zacznij od znieczulonej myszy z ogolonymi plecami.
Umieść mysz z pokrywką do szalki Petriego pod jej brzuchem, aby grzbieć pozostała pozioma.
Zanurz mosiężny blok w zlewce z wrzącą wodą, aż się nagrzeje.
Tymczasem podaj lek przeciwbólowy w formie zastrzyku podskórnego.
Następnie przyłóż podgrzaną mosiężną klockę do ogolonego grzbietu myszy.
Ciepło uszkadza zewnętrzną warstwę skóry, czyli naskórek, i rozprzestrzenia się na tkankę pod spodem, tworząc ranę oparzenia.
Usuń blokadę i wstrzyknij sól fizjologiczną podskórnie, aby zapobiec odwodnieniu.
Następnie załóż inokulum bakterii patogennych zawieszonych w buforze.
Użyj sterylnego patyczka watowego, aby równomiernie rozprowadzić bakterie na ranie.
Bakterie przyczepiają się do receptorów komórkowych za pomocą białek powierzchniowych, rozpoczynają kolonizację, tworzą ochronny biofilm i tworzą miejscową infekcję.
Ten myszy model infekcji oparzeniami jest gotowy do badań interakcji gospodarz-patogen.
Po znieczuleniu myszy, zgodnie z protokołem tekstowym, użyj maszynki do cięcia włosów o długości 50 ostrzeń, aby ogolić mysz z tyłu, odsłaniając jak najwięcej skóry. Następnie umieść pokrywkę 35-milimetrowej szalki Petriego pod odwłokiem myszy, aby utrzymać grzbiet w stosunkowo poziomej pozycji.
Użyj płyty grzewczej 220 VAC o wymiarach 10 na 10 cali, aby zagotować wodę w zlewce o pojemności 150 mililitrów. Zanurz mosiężny blok w zlewce, aż osiągniesz równowagę termiczną z wodą. Przed powstaniem urazu oparzenia podaj podskórny zastrzyk prewencyjnych środków przeciwbólowych dla złagodzenia bólu.
Dziesięć minut później, mając na sobie termowizy, delikatnie przyciskaj rozgrzany mosiężny blok do ogolonego miejsca na grzbiecie myszy przez siedem sekund, aby wywołać oparzenia. Podaj 0,5 mililitra bezpłodnej soli fizjologicznej przez zastrzyki podskórne. Pięć minut po wywołaniu urazu termicznego użyj pipety, aby zaszczepić 50 mikrolitrów zawiesiny bakteryjnej zawierającej 5 razy 10 do szóstej CFU w PBS na oparzenia myszy.
Następnie, poruszając sterylnym patyczkiem po skórze zygzakowato, rozsmaruj aliquot na oparzeniach, aby jak najrównomierniej rozłożyć komórki bakteryjne w poparzonym miejscu.