JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:40 min • March 31st, 2026
Zacznij od znieczulonej myszy z pokrywką do szalki Petriego pod jej odwłokiem, aby utrzymać grzbiet poziomy.
Mysz ma oparzenie na grzbiecie, które zostało zainfekowane Acinetobacter baumannii, bakterią Gram-ujemną.
Bakterie te są genetycznie modyfikowane tak, aby przenosić bioluminescencyjną operon.
Umieść mysz w komorze obrazowania bioluminescencyjnego utrzymywanej w optymalnej temperaturze i rozpocznij obrazowanie.
W miejscu zakażenia geny luxA i luxB operonu bioluminescencji kodują enzym lucyferazy. Geny luxCDE kodują enzymy syntetyzujące substrat lucyferazy.
Lucyferaza katalizuje utlenianie podłoża i wytwarza światło widzialne, powodując, że bakterie świecą luminescencyjnie.
Sygnał bioluminescencji wskazuje na obecność bakterii aktywnych metabolicznie w miejscu rany.
Za pomocą oprogramowania obrazowego ilościowo określamy intensywność sygnału bioluminescencji, aby oszacować dopuszczalne obciążenie bakteryjne.
Bezpośrednio po szczepieniu wykonaj obrazowanie bioluminescencyjne, uruchamiając oprogramowanie do obrazowania na żywo. W panelu sterowania kliknij Inicjalizuj. Następnie czekaj, aż kolor pudełka temperatury zmieni kolor na zielony, co oznacza, że temperatura stopnia w komorze próbki osiągnęła 37 stopni Celsjusza.
Umieść znieczuloną mysz na ciepłej scenie w komorze próbki, z zakażonymi oparzeniami bezpośrednio pod kamerą. Następnie w panelu sterowania wpisz znaczek "Luminescence".
Następnie wybierz "Automatyczna ekspozycja", aby czas naświetlania do obrazowania był optymalizowany przez oprogramowanie do obrazowania na żywo w oparciu o intensywność bioluminescencji. Wybierz "C" z rozwijanej listy "Pole widzenia". Wybierz opcję skanowania w średnim zakresie, aby oprogramowanie określiło odległość ogniskową.
Następnie dodaj znaczek obok nakładki. Teraz kliknij "Zdobyć", aby uchwycić obraz. Następnie w polu "Edytuj etykietę obrazu" kliknij OK. Pojawią się "Okno obrazu" oraz "Paleta opłat". Ustaw parametry Auto-ROI dla automatycznego wyboru.