JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:30 min. • February 26th, 2026
Weź pojemniki z sadzonkami pomidorów uprawianymi w sterylnym piasku.
Korzenie siewek są inokulowane albo dzikim typem produkującym celulozę, albo mutowanym szczepem bakterii patogennej roślin niedoborem celulozy.
Usuń materiał uszczelniający z jednego pojemnika, odwróć go na sterylnym papierze i stuknij, aby uwolnić cylinder z piaskiem zawierający roślinę.
Przepnij cylinder piaskowy wzdłuż, aby odsłonić korzeń.
Następnie zanurz korzeń w sterylnym buforze i potrząśnij, aby usunąć luźno przylegające bakterie.
Powtórz ten proces dla drugiego korzenia.
Przenieś wyprane korzenie do świeżego buforu. Sonikuj je, aby uwolniły gęsto przylegające bakterie.
Używaj tych sonikowanych zawiesin do przygotowywania seryjnego rozcieńczania, nakładania ich na agar i inkubacji, aby umożliwić powstawanie kolonii żywotnym bakteriom.
Wyższa liczba żywotnych w szczepie typu dzikiego w porównaniu do mutanta niedoborowego celulozy podkreśla kluczową rolę włókien celulozowych w wspieraniu przyczepności bakterii do powierzchni korzenia.
Aby określić liczbę żywotnych bakterii występujących w roślinach uprawianych w piasku, zacznij od usunięcia materiału uszczelniającego z góry i spodu pojemnika.
Umieść pojemnik na kawałku sterylnego papieru i delikatnie uderz nim o powierzchnię, aby poluzować piasek, a następnie delikatnie podnieś piasek z rośliną z pojemnika.
Gdy cylinder piasku i roślina są wolne na papierze, podziel piasek na pół, aby odsłonić korzeń rośliny. Jeśli chcesz, pobierz próbki piasku z okolic krawędzi pojemnika, a także z korzenia. Może to być przydatne do określenia rozprzestrzeniania się, gromadzenia i wzrostu bakterii.
Podnieś korzeń i usuń luźno przylegający piasek oraz bakterie, zanurzając korzeń w odmierzonej ilości wody lub buforu i delikatnie potrząsając. Określ żywotną liczbę komórek bakterii w powstałej zawiesini, nakładając je na odpowiedni podłoże, takie jak agar Luria. Oznacza to liczbę bakterii luźno związanych z korzeniem. Na koniec usuń ściśle związane bakterie za pomocą sonikacji i określ ich liczbę.