JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:27 min • March 31st, 2026
Zacznij od myszy wcześniej poddanej antybiotykom, aby wyczerpać mikrobiotę jelitową.
Delikatnie unieruchom mysz w pozycji pionowej, aby wydłużyć przełyk.
Następnie weź igłę do gavage doustną podłączoną do strzykawki zawierającej inokulum zarodników pochodzących z Clostridium difficile, beztlenowego patogenu bakteryjnego.
Włóż igłę gavage przez bok jamy ustnej i powoli przesuwaj ją do przełyku.
Gdy igła dotrze do środkowego przełyku, powoli podaj inokulum i delikatnie wyjmij igłę.
Podawane zarodniki przechodzą przez żołądek do jelita cienkiego, gdzie sole żółci wywołują kiełkowanie w bakterie wegetatywne C. difficile .
Bakterie te migrują do jelita beztlenowego, gdzie wyczerpanie konkurencyjnej mikrobioty umożliwia przyrost do powierzchni nabłonka, proliferację i tworzenie kolonii.
Skolonizowane bakterie uwalniają toksyny, które zakłócają połączenia nabłonkowe i uszkadzają barierę jelitową. To zakłócenie bariery sprzyja translokacji bakteryjnej do głębszych tkanek, powodując Clostridium difficile iinfection.
W kapturze laminarnym weź poddaną mysz i unieruchom głowę, delikatnie unieruchamiając zwierzę luźną skórą szyi i pleców.
Używanie palca wskazującego i upewnienie się, że zwierzę nie wydaje dźwięków ani nie wykazuje oznak stresu, dodatkowo unieruchamia głowę zwierzęcia i wydłuża przełyk. Utrzymuj mysz w pionowej, pionowej pozycji i delikatnie włóż igłę gavage do boku pyska. Kieruj igłę gavage wzdłuż podniebienia i powoli wprowadzaj ją do przełyku.
Gdy igła jest mniej więcej w połowie przełyku, wstrzyknij 25 mikrolitrów inokulum zarodników, a następnie delikatnie wyjmij igłę. Zwróć zwierzę do klatki i obserwuj pod kątem oznak kaszlu lub niedociągnięć oddechowych, które mogą wskazywać na niezamierzone podanie tchawicy.