Izolacja wirusów endogennych z dzikich Drosophila z wykorzystaniem zmodyfikowanych linii komórkowych podatnych na zakażenia
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 1:32 min. • October 29th, 2026
Zacznij od probówki zawierającej znieczulone dorosłe osobniki Drosophila tej samej płci i gatunku.
Dodaj bufor i zhomogenizuj próbkę, aby uwolnić endogenne populacje wirusów oraz bakterie.
Odwiruj homogenizat, a następnie przeprowadź nadsącz przez membranę za pomocą wirowania, aby usunąć bakterie i zanieczyszczenia.
Przenieś filtrat na płytkę wielodołkową zawierającą zmodyfikowane hodowle komórek Drosophila, które są podatne na wirusy RNA, i inkubuj.
Wirusy wnikają do komórki gospodarza poprzez endocytoza zależna od receptorów.
Po dostaniu się do wnętrza, genom wirusa replikuje się, wytwarzając dwuniciowe RNA (dsRNA) pośrednie.
Komórki gospodarza wykazują ekspresję białka supresorowego, które wiąże się z dsRNA, zapobiegając jego degradacji przez Dicer, enzym obronny gospodarza.
Umożliwia to syntezę wirusowego RNA i produkcję białek wirusowych, co sprzyja replikacji i amplifikacji wirusa.
Wysoka wiremia upośledza wzrost komórek gospodarza i wywołuje efekty cytopatyczne.
Krótko odwiruj płytkę.
Zebrać nadsącz zawierający populacje wirusów i przechowywać go w niskiej temperaturze do dalszych analiz.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych