JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:35 min. • August 31st, 2026
Rozpocznij od komórek ssaków zainfekowanych adenowirusem.
Przeprowadź wielokrotne cykle zamrażania i rozmrażania, aby zlizować komórki i uwolnić wiriony.
Odwiruj lizat w celu osadzenia resztek komórkowych. Zbierz nadsącz zawierający cząstki wirusowe.
Nanieś supernatant wirusowy na skokowy gradient chlorku cezu w celu rozdziału opartego na gęstości.
Ultrawirówka umożliwiająca migrację cząstek wirusowych zgodnie z ich gęstością wypornościową.
Nienaruszone wiriony zawierające pełny genom adenowirusowy są gęstsze ze względu na zapakowane DNA i osadzają się w dolnym pasmie, natomiast lżejsze, puste kapsydy i zanieczyszczenia pozostają w górnych warstwach.
Usuń górne warstwy. Zbierz dolny prążek wirionów zawierających genom.
Resuspender wiriony w chlorku cezu o jednorodnej gęstości i ponownie poddać ultrawirowaniu, aby doprecyzować rozdział i skoncentrować pełne cząstki.
Odrzuć górne warstwy i odzyskaj dolny prążek.
Przediałyzuj próbkę, aby usunąć chlorek cezu.
Wektory adenowirusowe o wysokiej czystości zawierające genom są teraz gotowe do dalszych zastosowań.
Aby przygotować lizat wirusowy do oczyszczania w gradiencie chlorku cezu, poddaj zawiesinę komórkową z wirusem czterokrotnemu zamrażaniu i r
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych