JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:08 min • August 31st, 2026
Zacznij od znieczyszonych myszy ułożonej na plecach, z ogoloną skórą w obrębie klatki piersiowej.
Zdezynfekuj ogoloną skórę.
Użyj obrazowania ultradźwiękowego, aby zwizualizować serce i zidentyfikować ścianę zewnętrzną lewej komory.
Pobrać mikrosyringę zawierającą wirusa rekombinowanego, który koduje gen testowy podejrzewany o wpływ na funkcję serca.
Pod kontrolą ultradźwięków wprowadź igłę w ścianę komory.
Wstrzyknij wirusa w warstwę mięśniową ściany.
Wykonaj drugą i trzecią iniekcję, celując w inne miejsca w komorze, aby uzyskać szerszą ekspresję genu.
Wyjmij igłę i pozwól myszy dojść do siebie.
Wirus wiąże się z receptorami na komórkach mięśnia komórkowego, inicjując endocytozę zależną od receptorów i transport genomu wirusowego do jądra.
Ekspresja genomu wirusowego prowadzi do syntezy kodowanego białka.
Model mysi jest teraz gotowy do oceny wpływu wirusowej ekspresji genów na funkcję serca.
Na początek wysterylizuj lewy dolny obszar klatki piersiowej znieczyszonej myszy, wykonując trzykrotnie okrężne ruchy, naprzemiennie używając preparatu do mycia na bazie jodu lub chlorheksydyny oraz alkoholu. Pod kontrolą obrazowania ultradźwiękowego wprowadź igłę strzykawki zawierającej wirusa do klatki piersiowej zwierzęcia.
zbliżyć końcówkę igły do przedniej ściany wolnej lewej komory i powoli wstrzyknąć od 10 do 15 µL wirusa. Potwierdzić prawidłowe wstrzyknięcie na obrazach USG, obserwując zwiększoną jasność w pobliżu końcówki igły. Wycofać igłę z serca i wprowadzić ją w inne obszary lewej komory, aby wykonać drugą i trzecią iniekcję tej samej ilości wirusa.