Wzrost wirusa w ludzkich komórkach nabłonka nosa hodowanych na granicy faz powietrze-ciecz

Rozpocznij od ludzkich komórek nabłonka nosa pokrytych śluzem, hodowanych na wkładce transwell w płytce wieloodworowej.

Strona podstawna hodowli styka się z pożywką, podczas gdy powierzchnia apikalna jest wystawiona na działanie powietrza, co symuluje granicę faz powietrze-ciecz (ALI) w jamie nosowej.

Przemyj kulturę buforem, aby usunąć warstwę śluzu.

Dodaj koronawirusa, zawieszonego w medium beztalerowym, do hodowli.

Inkubuj płytkę, wykonując sporadyczne kołysanie, aby zapewnić adsorpcję wirusa.

Usunąć inokulum wirusowe i przemyć buforem w celu usunięcia niewiązanych wirusów.

Wyjmij insert i uzupełnij dołek świeżą pożywką.

Inkubuj płytkę, aby umożliwić infekcję wirusową.

Koronawirus wiąże się z receptorem powierzchniowym komórki, wnika do niej poprzez endocytozę i uwalnia swój genom do cytoplazmy.

Genom wirusa replikuje się i produkuje białka, które następnie składają się w nowe wirusy.

Nowe wirusy są uwalniane apikalnie, rozprzestrzeniają się, infekując sąsiednie komórki i potęgując wzrost wirusa.

Hodować i różnicować hodowle nosowe na granicy faz powietrze-ciecz (ALI) w transwellach posiadających komorę podstawną i apikalną. Namnażać zdysocjowane ludzkie komórki nosowo-zatokowe w warunkach