JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:18 min • August 31st, 2026
Przygotować hodowlę ameb zainfekowanych wirusem olbrzymim znanym jako Faustovirus.
Zebrać nadsącz z hodowli zawierający Faustovirus.
Na siatce do mikroskopii elektronowej poddanej wyładowaniom żarowym nanieś supernatant.
Inkubować w celu umożliwienia adsorpcji cząstek wirusa na siatce.
Odsącz siatkę na papierze filtracyjnym, aby usunąć niezwiązane cząsteczki wirusa.
Nanieś kroplę molibdenu amonu.
Molibdan amonu działa jako barwnik negatywowy, wiążąc się z siatką wokół wirusa i przyciemniając tło w celu zwiększenia kontrastu podczas obrazowania.
Usuń nadmiar molibdanu amonu, osuszając siatkę na papierze filtracyjnym.
Umieść siatkę na szalce Petriego i pozostaw do wyschnięcia.
Następnie umieść siateczkę w uchwycie na próbki.
Wprowadź uchwyt do mikroskopu elektronowego.
Wykonaj zdjęcie Faustovirusa i zmierz jego rozmiar w celu przeprowadzenia dalszej analizy.
Aby przeprowadzić mikroskopię elektronową, nanieś 5 µl dodatniej próbki na siatkę poddaną wyładowaniom żarzeniowym i inkubuj w temperaturze pokojowej przez około 20 minut. Ostrożnie wysusz siatkę, a następnie dodaj niewielką ilość 1% molibdenu amonu i inkubuj przez 10 sekund. Po ostrożnym usunięciu kropli pozostaw siatkę do wyschnięcia na pięć minut. Następnie ustaw mikroskop elektronowy na 200 keV. Po tym umieść siatkę w uchwycie i wprowadź uchwyt do mikroskopu. Kliknij ikonę przeglądu próżni i sprawdź stan próżni. Następnie zamknij zawory, ustaw rozmiar plamki (spot size) na 5 oraz powiększenie 25 000 przed rozpoczęciem obserwacji. Po zlokalizowaniu wirusa olbrzymiego na ekranie akwizycji, użyj narzędzia pomiarowego, aby zmierzyć wirusa.
Przeprowadzić badania biologii molekularnej oraz sekwencjonowanie genomu wirusa zgodnie z protokołem tekstowym.