JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:06 min. • August 31st, 2026
Należy rozpocząć od wielowarstwowej komory hodowlanej zawierającej transfektowane komórki ssaków produkujące wektory wirusa towarzyszącego adenowirusom.
Energicznie potrząśnij komorą, aby oderwać przylegające komórki, uwalniając komórki zawierające wirusy oraz pozakomórkowe cząsteczki wirusowe do medium.
Przenieś zawartość do probówki i odwiruj w celu osadzenia komórek zawierających wirusa.
Zebierz nadsącz zawierający wirusa zewnątrzkomórkowego i przelej go do butelki do przechowywania.
Resuspenduj osad w buforze do lizy i inkubuj.
Enzymy i detergenty zawarte w buforze lizują komórki i uwalniają nienaruszone wirusy wewnątrzkomórkowe do roztworu.
Odwiruj lizat, aby wytrącić szczątki komórkowe w formie osadu. Zbierz supernatant zawierający wirusy i dodaj go do tej samej butelki z wirusami pozakomórkowymi.
Przechowywać surową zawiesinę wirusową w niskiej temperaturze do czasu dalszej puryfikacji.
Po inkubacji energicznie wstrząśnij komorą hodowli komórkowej, aby odczepić komórki, aż pożywka stanie się mętna, a następnie przelej ją do czterech probówek wirówkowych o pojemności 500 ml.
Odwirować komórki przy 18,0 x g przez 30 minut w temperaturze 4 °C. Prelać klarowny nadsącz do jednej litrowej
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych