Transdukcja zapłodnionych zarodków szczura z wykorzystaniem wektora lentiwirusowego

Przygotować szalkę do mikroiniekcji z kroplą pożywki do hodowli embrionów w centrum, przykrytą olejem mineralnym w celu zapobiegania parowaniu.

Umieść szalkę pod mikroskopem odwróconym.

Umieść kapilarę do mikroiniekcji oraz pipetę trzymającą w układzie mikromanipulatora pod mikroskopem.

Kapilara do mikroiniekcji jest napełniana zawiesiną wektorów lentiwirusowych przenoszących transgen.

Następnie przenieś zapłodnione embriony szczura do medium.

Unieruchom embrion za pomocą pipety holdingowej, stosując ssanie.

Przy większym powiększeniu wprowadź kapilarę do mikroiniekcji przez pozakomórkową otoczkę glikoproteinową zarodka, czyli zonę pellucida, i wstrzyknij zawiesinę lentiwirusową do przestrzeni periwitellinej.

Następnie przenieś wstrzyknięte embriony do naczynia hodowlanego i inkubuj.

Wirus wnika do zarodka i uwalnia do cytoplazmy swój genom zawierający transgen.

Następnie ulega ono odwrotnej transkrypcji do DNA i integruje się z genomem embrionu, wprowadzając transgen.

Przetransdukowane embriony są teraz gotowe do dalszej obróbki.

W celu przeprowadzenia mikroiniekcji wektora lentiwirusowego pod błonę przejrzystą embrionów w stadium jednego komórki, należy użyć wyciągarki do pipet w celu przyg