JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:56 min. • September 30th, 2026
Użyj płytki wielodołkowej z inaktywowanym termicznie surowicą pacjenta zawierającą przeciwciała specyficzne dla koronawirusa w dołkach testowych. Do kontroli należy zastosować surowicę zdrowego człowieka.
Do próbek surowicy dodać pseudowirusy wykazujące białka kolca koronawirusa i niosące RNA kodujące zielone białko fluorescencyjne, a następnie inkubować.
W studzience testowej przeciwciała wiążą się z białkami spike i neutralizują pseudowirusy, podczas gdy w studzience kontrolnej przeciwciała niespecyficzne nie wiążą się z białkami spike, pozostawiając pseudowirusy w stanie wolnym.
Dodaj mieszaninę do monowarstw komórek nabłonkowych. Inkubuj w celu adsorpcji wirusa.
Do każdej studni dodaj półpłynne medium nakładkowe, aby ograniczyć dyfuzję wirusa. Inkubuj.
W kontroli niezwiązane pseudowirusy wiążą się z receptorami komórkowymi, wnikają do komórek, uwalniają RNA i wykazują ekspresję GFP, tworząc fluorescencyjne ogniska infekcji.
W studzience testowej pseudowirusy zneutralizowane przez przeciwciała nie wnikają do komórek, co zapobiega tworzeniu się ognisk infekcji.
Za pomocą obrazownika fluorescencyjnego należy policzyć fluorescencyjne ogniska infekcji.
Brak ognisk infekcji w studience testo
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych