JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:31 min. • September 30th, 2026
Zacznij od hodowli komórek ssaków w pożywce z niską zawartością surowicy.
Dodaj kompleks DNA-lipid do komórek.
Kompleks zawiera lentiwiruseowe plazmidy opakowujące oraz plazmid ekspresyjny kodujący gen zainteresowania.
Inkubować, aby umożliwić wniknięcie kompleksu do wnętrza komórek.
Wymień pożywkę, aby usunąć pozostałości odczynnika do transfekcji, a następnie inkubuj.
Wewnątrz komórki plazmidowe DNA wnikają do jądra i kierują syntezą viralnego RNA przenoszącego gen docelowy oraz komponentów wirusowych, w tym białek kapsydu i otoczki, odwrotnej transkryptazy oraz integrazu.
Komponenty te łączą się w rekombinowane cząsteczki lentiwirusowe, które wypączkowują z błony komórki gospodarza.
Zebrać pożywkę zawierającą uwolnione cząstki wirusa.
Odwiruj próbkę w celu osadzenia resztek komórkowych, a następnie przefiltruj nadsącz wirusowy, aby usunąć pozostałe zanieczyszczenia.
Wiruj z dużą prędkością, aby odwirować nienaruszone cząstki wirusowe w formie osadu.
Odlej nadsącz i resuspenduj pellet wirusowy w niewielkiej objętości świeżej pożywki.
Przechowywać skoncentrowany rekombinowany lentiwirus w niskiej temperaturze do dalszych zastosowań.
Aby rozpocząć produkcję stężonego lentiwirusa, wysiej 1,5 ×
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych