JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:08 min. • September 30th, 2026
Rozpocznij od plazmidu minigenomu, który naśladuje genom wirusa Ebola i koduje wirusowe białka strukturalne, glikoproteiny oraz reporter lukcyferazy.
Dodaj plazmidy pomocnicze kodujące polimerazę T7, wirusową nukleoproteinę oraz komponenty wirusowej polimerazy niezbędne do replikacji i transkrypcji.
Do plazmidów dodać liposomowy odczyn do transfekcji, wymieszać na wortexie, a następnie inkubować mieszaninę w celu utworzenia kompleksów plazmid-lipid.
Dodaj tę mieszaninę do ludzkich komórek nerkowych, wymieszaj delikatnie i inkubuj.
Kompleks lipidowy łączy się z komórką. Plasmidy wnikają do komórki.
Plazmidy pomocnicze kodują odpowiadające im białka.
Następnie polimeraza T7 transkrybuje minigenom w wirusowe RNA genomiczne, które zostaje niezwłocznie pokryte nukleoproteinami.
Wirusowy kompleks polimerazy wiąże się z wirusowym RNA genomicznym i przepisuje go na wirusowe mRNA. Te cząsteczki mRNA kodują wirusowe białka strukturalne i glikoproteiny.
Białka wirusowe łączą się, tworząc niepatogenne cząsteczki wirusopodobne zdolne do transkrypcji i replikacji lub trVLPs zawierające gen reporterowy lucyferazy.
Uzupełnić świeżą pożywką, aby utrzymać żywotność komórek i wspomóc produkcję trVLP.
Przeprowa
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych