JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:35 min. • September 30th, 2026
Przygotuj hodowle komórek ssaków. Zainfekuj hodowlę badawczą wirusem, pozostawiając hodowlę kontrolną niezinfekowaną.
Pozostaw wirus do adsorpcji, a następnie wymień medium.
Wirus wnika do komórki i uwalnia swój genom. Wirus wykazuje ekspresję białka wirulencji, które destabilizuje kompleksy czynników transkrypcyjnych gospodarza i hamuje transkrypcję komórki gospodarza.
Komórki kontrolne zachowują jednak aktywną transkrypcję.
Dodaj analog nukleozydu, który zostanie włączony do nowo syntetyzowanych cząsteczek RNA.
Zebierz wypłukane komórki.
Utrwal komórki, aby zachować ich strukturę. Odwiruj komórki i przemyj je buforem.
Dodaj detergent w celu permeabilizacji komórek, a następnie przemyj je.
Dodaj chemicznie zmodyfikowany barwnik fluorescencyjny, który reaguje z analogiem nukleozydu, aby znakować nowo syntetyzowane RNA; następnie wypłucz.
Wykonaj immunobarwienie w celu fluorescencyjnego oznakowania antygenów wirusowych, co pozwoli na zidentyfikowanie zainfekowanych komórek.
Użyj cytometrii przepływowej, aby wykryć fluorescencję RNA gospodarza i antygenu wirusowego.
Porównaj intensywność fluorescencji RNA między populacją kontrolną a badaną. Przesunięcie w dół w populacji badanej, wskazujące na
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych