JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:36 min. • September 30th, 2026
Rozpocznij od hodowli ludzkich komórek nabłonkowych nerki hodowanych w medium bogatym w składniki odżywcze.
Wymień pożywkę na pożywkę z obniżoną zawartością surowicy, aby zminimalizować interferencję surowicy i zwiększyć wydajność transfekcji.
Dodaj mieszaninę do transfekcji do komórek, podając ją kroplami.
Mieszanina zawiera retrowirusową konstrukcję DNA niosącą interesujący gen, plazmid pakujący dostarczający niezbędne białka wirusowe oraz polietylenoiminę, która tworzy kompleksy z plazmidowym DNA w celu ułatwienia transfekcji.
Inkubuj komórki, aby umożliwić pobranie kompleksu DNA.
Wymień medium, aby usunąć pozostałości odczynników do transfekcji.
Wewnątrz komórki plazmidowe DNA przedostaje się do jądra, gdzie kieruje produkcją białek wirusowych oraz wirusowego RNA przenoszącego geny zainteresowania.
Komponenty te łączą się i wypączkowują do medium jako rekombinowane cząstki retrowirusowe.
Zebrać pożywkę zawierającą wirusa i przechowywać ją przez krótki czas w niskiej temperaturze, aby zachować stabilność wirusową.
Odwiruj w celu odwirowania resztek komórkowych.
Rozdziel supernatant wirusowy na alykwooty, zamroź gwałtownie w ciekłym azocie i przechowuj w niskiej temperaturze do późniejszyc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych