JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:32 min. • September 30th, 2026
Przygotuj rozcieńczenia seryjne zawiesiny wirusa RSV (respiratory syncytial virus).
Wprowadź każdą z rozcieńczeń do osobnych studni płytki wielodołkowej wysianej ssaczymi komórkami podatnymi na RSV.
Inkubuj, aby umożliwić wirusowi związanie się z receptorami powierzchniowymi komórek, pośredniczenie w fuzji błon i uwolnienie genomu do cytoplazmy.
Następnie nałóż półpłynne podłoże nakładkowe w celu ograniczenia dyfuzji wirusa i inkubuj.
Zakażone komórki wykazują ekspresję wirusowego białka fuzyjnego, które pośredniczy w fuzji komórka-komórka, prowadząc do powstania struktur wielojądrowych nazywanych syncytiami.
W miarę postępu replikacji wirusa syncytia te ulegają degeneracji i tworzą przejaśnienia znane jako plaques.
Delikatnie potrząśnij płytką, aby usunąć warstwę overlay, a następnie wypłucz komórki, aby usunąć zanieczyszczenia.
Nanieś barwnik w celu zabarwienia żywych komórek, pozostawiając plaki niezabarwione.
Usunąć barwnik, zdekontaminować płytkę w wybielaczu, a następnie wypłukać wodą.
Pozostaw płytkę do wyschnięcia na powietrzu.
Wybierz dołki z wyraźnymi plakami i policz je, aby wyznaczyć miano wirusa.
Aby przeprowadzić test miareczkowania płytek, najpierw należy przygotować 2X minimal
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych