JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:36 min. • September 30th, 2026
Należy rozpocząć od użycia lentiwirusów niosących gen oporności na antybiotyk.
Wiruj w celu oddzielenia resztek komórkowych. Zbierz nadsącz zawierający wirusy i przefiltruj go przez membranę wolną od surfaktantów.
Pozwala to na przenikanie lentiwirusów przy jednoczesnym zatrzymaniu zanieczyszczeń.
Wirować w ultrawirowarce w celu skoncentrowania wirusów. Usunąć nadsącz i dodać bufor w celu resuspensji wirusów.
Następnie przenieś zawiesinę do probówki do mikrocentryfugi i wymieszaj ją w wstrząsarku typu vortex.
Wirować w celu usunięcia pęcherzyków powietrza. Następnie dodać wirusy do pożywki z komórkami macierzystymi embrionu myszy i wymieszać.
Wiruj próbkę, aby zwiększyć kontakt wirusa z komórkami, a następnie inkubuj.
Wirusy wprowadzają swoje genomy do wnętrza komórek.
Usunąć medium, dodać świeże medium i inkubować.
Genom wirusa jest konwertowany do postaci DNA i integruje się z genomem gospodarza, co umożliwia produkcję mRNA kierującej syntezą białka oporności na antybiotyk.
Wymień medium na świeże medium uzupełnione antybiotykiem selekcyjnym i inkubuj.
Komórki wykazujące ekspresję białka oporności na antybiotyk przeżywają, co prowadzi do powstania stabilnych linii komórek zainfekowanych wir
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych