Wstrzyknięcie komórek rakowych do gruczołu krokowego: technika dostarczania komórek rakowych w celu ustalenia ortotopowego modelu myszy raka prostaty

Ortotopowe wstrzyknięcie guza do gruczołu krokowego dostarcza komórki nowotworowe pasujące do histotypu tkanki gruczołu krokowego bezpośrednio do gruczołu krokowego zwierzęcia biorcy.

Na początek przygotuj znieczulonego samca myszy w pozycji leżącej. Wykonaj nacięcie brzucha w linii środkowej i wypreparuj mięśnie wewnętrzne, aby odsłonić jamę brzuszną. Zlokalizuj jeden z przednich płatów prostaty. Te płaty prostaty są przyczepione do mniejszej krzywizny pęcherzyków nasiennych i leżą blisko pęcherza moczowego.

Teraz wstrzyknij schłodzoną zawiesinę komórek raka prostaty zmieszaną z pożądaną macierzą błony podstawnej do długiej osi przedniego płata prostaty. Upewnij się, że zawiesina komórkowa jest całkowicie dostarczona i delikatnie wycofaj igłę. Pozwól matrycy zestalić się i osadź w niej komórki.

Następnie umieść płat prostaty wraz z pęcherzykiem nasiennym z powrotem w jamie brzusznej. Zszyj nacięcie chirurgiczne. Pozwól myszy na odzyskanie sprawności. Sprawdzaj mysz co tydzień, aby obserwować wzrost guzów ortotopowych w przednim płacie prostaty.

Po potwierdzeniu braku reakcji na szczypanie palców u nóg, nałóż maść na oczy myszy i zgol całe futro z brzucha zwierzęcia. Wysterylizuj odsłoniętą skórę za pomocą trzech rund peelingu chirurgicznego za pomocą sterylnych, nieprzywierających wacików, a następnie sterylnych chusteczek nasączonych alkoholem. Gdy skóra jest sucha, umieść mysz w pozycji leżącej na czystej powierzchni nad poduszką grzewczą bezpośrednio pod obiektywem czystego mikroskopu operacyjnego i przykryj zwierzę sterylną serwetą z małym otworem wyciętym nad brzuchem.

Wykonaj 1-centymetrowe nacięcie w zewnętrznej skórze i wewnętrznej muskulaturze brzucha wzdłuż linii środkowej brzucha powyżej penisa i gruczołów napletkowych. Zlokalizuj jeden z obustronnych pęcherzyków nasiennych i przyczepione przednie płaty prostaty, które są zwykle tylne, boczne i nieco wyższe od pęcherza moczowego. Poproś asystenta, aby wymieszał roztwór komórek rakowych macierz Myc-CaP z delikatnym pipetowaniem i powoli zasysał 30 mikrolitrów komórek do igły o rozmiarze 28 dołączonej do strzykawki o pojemności 50 mikrolitrów.

Następnie, za pomocą kleszczy tkankowych Graefe, delikatnie podnieś końcówkę jednego pęcherzyka nasiennego, aby wytworzyć napięcie na tkance bez nakłuwania pęcherzyka, i ostrożnie włóż skos igły równolegle do długiej osi przedniego płata prostaty. Powoli wstrzyknij całą objętość komórek do płata, a następnie powoli wycofaj igłę, aby zapobiec wyciekowi.

Udane wstrzyknięcie będzie widoczne po obrzęku wewnętrznego płata prostaty. Ostrożnie i stabilnie utrzymuj pęcherzyk nasienny i wstrzyknięty płat prostaty na zewnątrz myszy przez około 30 sekund, aby umożliwić częściowe zestalenie się matrigelu w płacie. Użyj sterylnego aplikatora z końcówką poliestrową, aby zebrać wyciek roztworu komórkowego do jamy brzusznej, aby zapobiec rozwojowi guza nieortotopowego.

Dokładne wstrzyknięcie do gruczołu krokowego ma kluczowe znaczenie dla rozwoju guza ortotopowego. Zachowanie szczególnej ostrożności, aby uniknąć przebicia pęcherzyka nasiennego, powolne wstrzykiwanie zawiesiny komórek rakowych i zbieranie wszelkich wycieków komórkowych zwiększy powodzenie tej procedury.

Teraz delikatnie przywróć pęcherzyk nasienny i wstrzyknięty płat do jamy brzusznej bez wywierania nacisku na płat i wymień wszelkie zewnętrzne tkanki. Za pomocą wchłanialnych szwów igłowych 5-0 vicryl z odwróconym cięciem, zamknij wewnętrzną muskulaturę brzucha ciągłymi szwami, a następnie zamknij zewnętrzną skórę brzucha przerywanymi szwami za pomocą niewchłanialnych szwów igłowych z nylonu monofilamentowego 4-0

Następnie zastosuj analgezję pooperacyjną i umieść mysz w klatce bez ściółki do połowy na poduszce grzewczej z monitorowaniem aż do pełnego wyzdrowienia.

• Prostate Cancer Model - A lab representation to study the progression & treatment of prostate cancer.
• Intraprostatic Injection - Technique of injecting medication or solution directly into the prostate.
• Matrigel - A gelatinous protein matrix used in tumor cell research.
• Orthotopic Tumor Model - Study model wherein tumor cells are implanted in their original organ.
• Seminal Vesicles - Male reproductive glands located near the prostate, integral to the injection procedure.

• Introduce Prostate Cancer Model – Biological method to examine prostate cancer (e.g., intraprostatic injection).
• Key Concepts – Involve steps like shaving, sterilizing, incising and suturing (e.g., prostate biopsy procedure video).
• Underlying Mechanisms – Seminal vesicles and anterior prostate lobes are involved (e.g., prostate cancer real images).
• Connect to Experiment – Demonstrate how injections ensure successful tumor implantation within prostate.

• What is intraprostatic injection used for in a prostate cancer model?
• How is the matrigel cancer cell solution involved in the procedure?
• Why is careful handling of seminal vesicles and prostate lobes crucial in this experiment?

• Practical Applications – Used in surgical training and cancer treatment research (e.g., prostate cancer injection).
• Industry Impact – Benefits medical industries, particularly oncology and urology (e.g., injection for prostate cancer).
• Societal Importance – Advancement in prostate cancer treatment techniques (e.g., injection prostate).
• Link to Scientific Advancements – Continuous improvement of prostate cancer models for research.