Charakterystyka funkcjonalnej chemooporności: metoda oceny lekooporności w komórkach nowotworowych za pomocą testu klonogennego

Aby ocenić chemooporność komórek rakowych, zacznij od pobrania płytki wielodołkowej. Zasiej zawiesinę pożądanych wrażliwych na lek komórek raka prostaty do kilku studzienek, a zawiesinę lekoopornego wariantu komórek do pozostałych studzienek.

Inkubuj kulturę, aby ułatwić przyczepianie komórek do płytki hodowlanej. Oba typy komórek należy traktować szeregiem rosnących dawek wybranego roztworu leku. Cząsteczki leku dostają się do wrażliwych komórek i powodują śmierć komórek nawet w najniższych stężeniach. Jednak oporne komórki wydalają cząsteczki leku przez wyspecjalizowane pompy wypływu leku, co umożliwia im przetrwanie pomimo narażenia na wyższe stężenia leku.

Odessać zużyte podłoże zawierające zanieczyszczenia i roztwór leku. Uzupełnij świeżą, wolną od leków pożywką wzrostową. Inkubuj, aby umożliwić ocalałym komórkom opornym na leki namnażanie się i tworzenie kolonii. Dodaj odpowiedni roztwór barwiący, aby zabarwić kolonie żywych komórek.

Umyj kulturę, aby usunąć nadmiar barwnika. Policz liczbę kolorowych kolonii w każdej studzience. W studzienkach zawierających komórki wrażliwe na leki znajduje się bardzo niewiele żywotnych kolonii. Natomiast studzienki zawierające komórki oporne