Mikroskopia fluorescencyjna zewnątrzkomórkowych pułapek neutrofilowych lub NET: technika obserwacji interakcji adhezyjnej między komórkami nowotworowymi a NET
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:15 min. • April 30th, 2023
W stanach patologicznych, takich jak rak, aktywowane neutrofile uwalniają zewnątrzkomórkowe pułapki neutrofili lub NET - siatkę zewnątrzkomórkowego DNA z powiązanymi enzymami i białkami przeciwdrobnoustrojowymi - które zatrzymują krążące komórki rakowe.
Aby zobrazować interakcję adhezyjną między NET a komórkami nowotworowymi in vitro, zacznij od hodowli neutrofili o niskiej gęstości, podtypu neutrofili, w naczyniu hodowlanym pokrytym polimerem, które sprzyja przyłączaniu się komórek. Inkubuj przez kilka godzin, aby stymulować neutrofile do tworzenia sieci przypominających sieć.
Dodaj zawiesinę komórek rakowych znakowanych czerwoną fluoresceiną do hodowli neutrofili. Inkubuj komórki rakowe za pomocą NET przez krótki czas, aby ułatwić interakcję komórka rakowa-NET. NET-DNA działa jako czynnik chemotaktyczny, który przyciąga komórki rakowe i wspomaga ich adhezję do NET.
Usuń zużyte medium. Delikatnie umyj kulturę odpowiednią świeżą pożywką, aby dobrze usunąć wszelkie nieprzyłączone komórki nowotworowe z hodowli.
Teraz dodaj nieprzepuszczalną dla błony zieloną fluorescencyjną plamę jądrową, aby selektywnie zabarwić zewnątrzkomórkowe sieci NET. Obserwuj kulturę pod mikroskopem fluoresce
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych