Błyskawiczne zamrażanie tkanki mięśniowej do cięcia: protokół uzyskiwania ultracienkich skrawków szybko zamrożonej mysiej tkanki mięśniowej

Zamrażanie błyskawiczne to technika, za pomocą której próbki tkanek są szybko zamrażane do bardzo niskich temperatur. Pomaga zachować natywną strukturę DNA, RNA i białek wewnątrz tkanki.

Aby zatrzasnąć mięsień kończyny, zacznij od pobrania świeżo pobranej tkanki mięśniowej z tylnej kończyny myszy.

Następnie weź ciekły azot do styropianowego pudełka i zanurz zlewkę zawierającą izopentan - ciecz o wysokim stopniu przewodzenia - w ciekłym azocie.

Zamrozić izopentan, aż roztwór stanie się lepki. Jednocześnie nałóż kroplę płynnego środka do zamrażania na kawałek korka.

Ustaw tkankę mięśniową kończyny tylnej, trzymając jej ścięgno i osadź kawałek tkanki pionowo w płynnym podłożu zamrażającym. Ta orientacja pomaga w późniejszym określeniu pola przekroju poprzecznego mięśnia.

Zanurz na krótko kawałek korka z przyczepioną tkanką mięśniową w wstępnie schłodzonej kąpieli izopentanowej. Pomaga to w szybkim i równomiernym zamrażaniu tkanki mięśniowej.

Pożywka zamrażająca krzepnie w niskiej temperaturze i tworzy galaretowatą warstwę wokół tkanki mięśniowej, utrzymując ją na miejscu. Umieść blok mięśniowy w kriomikrotomie, aby uzyskać cienko pokrojone fragmenty.

Umieść skrawki na szkiełkach podst