Ekstrakcja nienaruszonej nerki od myszy: technika uzyskiwania nerki bez torebki nerkowej z modeli mysich

U gryzoni nerka ma ochronną włóknistą powłokę zewnętrzną zwaną torebką nerkową, a nad nią warstwę tłuszczu okołonerkowego. Aby usunąć mysią nerkę bez otaczających warstw, zacznij od umieszczenia uśpionej myszy w pozycji leżącej na plecach na łóżku chirurgicznym.

Naciąć skórę brzucha i warstwy mięśni. Kontynuuj wykonywanie podłużnych nacięć, aż jama brzuszna zostanie odsłonięta. Następnie zlokalizuj jelita i lekko je unieś. Przetnij pod jelitami i usuń je z ciała myszy, aby odsłonić nerki.

Następnie znajdź moczowód i przetnij leżące poniżej tkanki łączne, aby nerki oddzieliły się od jamy brzusznej. Wyciąć obie nerki indywidualnie. Umieść wyekstrahowaną nerkę w naczyniu zawierającym lodowaty bufor i obserwuj ją pod mikroskopem preparacyjnym.

Teraz usuń tłuszcz okołonerkowy z nerki, aby uwidocznić miedniczkę nerkową, lejkowatą, rozszerzoną część moczowodu. Odetnij część miedniczki nerkowej od podstawy, aby usunąć resztki moczowodu.

Na koniec przebić powierzchownie zewnętrzną włóknistą torebkę nerkową. Korzystając z utworzonego otworu, ostrożnie oderwij całą torebkę nerkową od powierzchni nerki. Pomaga to usunąć nadnercze - gruczoł dokrewny przyczepiony do torebki nerkowej - i uzyskać nienaruszoną nerkę.

Za pomocą kleszczy do tkanek wewnętrznych i nożyczek do rozwarstwiania wewnętrznego uszczypnij jelita i oderwij je od ściany brzucha. Jednocześnie należy odciąć spód jelit od ciała na bliższej dwunastnicy i dystalnej części okrężnicy, aby uzyskać dostęp do przestrzeni zaotrzewnowej zawierającej nerki.

Delikatnie ściśnij i unieś dystalny koniec moczowodu za pomocą kleszczy tkankowych. Za pomocą nożyczek preparacyjnych przeciąć pod ściśniętym moczowodem w kierunku nerki, aż zostanie uwolniony od otaczającej tkanki łącznej. Po odsłonięciu nerek należy je usunąć pojedynczo.

Napełnij naczynie pokryte elastomerem silikonowym lodowatym roztworem KRB. Przenieś nerkę do naczynia preparacyjnego i upewnij się, że jest całkowicie zanurzona. Użyj cienkich nożyczek sprężynowych i kleszczy wewnętrznych, aby usunąć tkankę tłuszczową z podstawy nerki, aby odsłonić dystalną miedniczkę nerkową lub RP i proksymalny moczowód.

Usuń bliższy moczowód i część dystalnego RP z podstawy za pomocą cienkich nożyczek sprężynowych i kleszczyków. Przekłuć zewnętrzną torebkę nerkową kleszczami z cienką końcówką, odchylając końcówki od trzonu nerki. Za pomocą kleszczy każdą ręką ściśnij luźne końce kapsułki i rozsuń je, aż pozostała błona torebki nerkowej zostanie całkowicie usunięta.