JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:30 min. • February 22nd, 2023
Bezkomórkowe rusztowania całych narządów składają się z trójwymiarowej macierzy zewnątrzkomórkowej z nienaruszoną siecią naczyniową. Rusztowania te zachowują określony skład tkankowy i integralność funkcjonalną oraz odgrywają istotną rolę w bioinżynierii narządów.
Aby przygotować pozbawioną komórek nerkę szczura, najpierw należy uzyskać świeżo pobraną nerkę szczura wraz z jej głównym unaczynieniem tętniczym i żylnym - aortą brzuszną i żyłą główną dolną. Zwiąż moczowód, mniejsze rozwidlenia tętnicze i żylne, aby zapobiec wyciekowi płynu podczas późniejszego procesu perfuzji.
Umieść nerkę w odpowiednim buforze, aby zapewnić nawodnienie narządów. Wprowadzić cewniki o odpowiedniej wielkości do głównych naczyń krwionośnych i zabezpieczyć je. Podłączyć cewnik do pompy perystaltycznej. Perfuzja nerki za pomocą buforu zawierającego antykoagulant o odpowiedniej szybkości przepływu i ciśnieniu przez pożądany czas.
Ten krok pomaga skutecznie usunąć krew z narządu przez odpływ żylny. Zmień perfuzat na niejonowy środek powierzchniowo czynny, aby przeniknąć przez błony komórkowe. Następnie należy perfuzjować narząd anionowym środkiem powierzchniowo czynnym, aby skutecznie rozpuścić błony komórkowe i jądrowe, co powoduje lizę komórek i uwolnienie zawartości wewnątrzkomórkowej.
Uwolnione składniki komórkowe i zanieczyszczenia wypływają z nerki, stopniowo czyniąc ją przezroczystą. Wstrzyknąć do pozbawionej komórek nerki odpowiedni bufor zawierający antybiotyki i antykoagulanty w celu usunięcia pozostałości środka powierzchniowo czynnego i wszelkich pozostałych zanieczyszczeń z narządu. Antybiotyki zapobiegają prawdopodobieństwu rozwoju bakterii w narządzie pozbawionym komórek.
Zbierz lewą nerkę z aortą brzuszną i żyłą główną dolną. Podwiązać moczowód, aortę piersiową, żyłę główną górną i gałęzie aorty brzusznej. Utrzymuj narząd nawodniony w DPBS na 10-centymetrowej szalce Petriego. Kankaniuluj aortę brzuszną i żyłę główną dolną za pomocą cewnika o rozmiarze 23.
Aby usunąć resztki krwi, połącz kaniulę z pompą perystaltyczną i przemyj narząd 500 mililitrami DPBS i 16 jednostkami na mililitr heparyny przez 90 minut przy 5 obr./min i 37 stopniach Celsjusza. Aby usunąć komórkowość nerki, należy ją perfuzjować 1% Triton X-100 przez 3 godziny, a następnie 0,75% roztworem SDS przez 6 godzin pod stałym ciśnieniem 40 mililitrów rtęci.
Aby usunąć resztki SDS, należy perfuzjować próbkę z 1% penicyliną w wodzie destylowanej przez 18 godzin, a następnie sterylnym DPBS i 16 jednostkami na mililitr heparyny przez 90 minut.