JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 wyświetleń • 3:17 min • July 8th, 2025
Przednia część oka pokryta jest rogówką - przezroczystą warstwą, która umożliwia przepuszczanie promieni świetlnych. Rogówka rozciąga się do twardówki - białej tkanki ochronnej wokół oka. Część oka, która składa się z rogówki otoczonej cienkim pierścieniem twardówki, to guzik rogowo-twardówkowy.
Aby wyciąć guzik rogówkowo-twardówkowy, umieść nienaruszone oko świni na szalce Petriego. Usuń spojówkę - śluzowatą powłokę wokół twardówki - wraz z otaczającymi mięśniami zewnątrzgałkowymi, aby uzyskać dostęp do osłony twardówki. Potraktuj oko odpowiednim roztworem dezynfekującym, aby usunąć wszelkie zanieczyszczające mikroorganizmy z powierzchni oka.
Zmyj środek dezynfekujący roztworem buforowym. Przenieś zdezynfekowane oko do świeżego naczynia do hodowli. Wykonaj nacięcie na twardówce w pobliżu granicy rogówki. Korzystając z tego otworu, wykonaj pełne cięcie obwodowe, aby podzielić oko na dwie części.
Wizualizuj wewnętrzną stronę segmentu czołowego, aby zlokalizować powłokę naczyniową oka przyczepioną do twardówki. Tkanka ta składa się z pigmentowanej tęczówki, pierścieniowego ciała rzęskowego i części warstwy naczyniówki. Odłącz błonę naczyniową oka, aby uwidocznić warstwę oponowo-twardówkową. Przechowywać przycisk w sterylnym roztworze buforowym do dalszych testów.
Użyj sterylnych kleszczy, aby przenieść gałkę oczną na szalkę Petriego. Usuń spojówkę i tkankę mięśniową wokół gałki ocznej za pomocą ostrza skalpela # 15 i kleszczy. Następnie, trzymając nerw wzrokowy kleszczami, delikatnie unieś gałkę oczną i przenieś ją do półlitrowego słoika wypełnionego sterylnym PBS.
Gdy wszystkie gałki oczne zostaną oczyszczone z otaczających tkanek, użyj sterylnych kleszczy, aby przenieść je do innego półlitrowego słoika wypełnionego 3% jodonem powidonu w PBS. Po tym, jak gałki oczne znajdują się w słoiku przez jedną minutę, przenieś je do trzeciego słoika zawierającego sterylny PBS.
Umieść gałkę oczną na czystej szalce Petriego i użyj kleszczy, aby utrzymać ją stabilnie. Za pomocą ostrza skalpela # 10A wykonaj cięcie w pobliżu rogówki. Użyj nożyczek, aby wyciąć rogówkę, pozostawiając około 3 milimetry otaczającej ją twardówki. Upewnij się, że ostry koniec nożyczek znajduje się w przestrzeni nadnaczyniówkowej i nie przebija tęczówki.
Przytrzymaj guzik korneo-twardówkowy kleszczami i użyj innej pary kleszczyków ze spiczastymi końcami, aby delikatnie oddzielić tkankę błony naczyniowej oka. Następnie podnieś guzik korneotwardówki, aby oddzielić go od pozostałej części gałki ocznej. Krótko przepłukać guzik w 1,5% roztworze jodowidonu w PBS. Następnie umieść guzik w sterylnym PBS na 12-dołkowej płytce.