JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:24 min. • July 8th, 2025
Oko kręgowców jest podzielone na segment przedni - znajdujący się przed soczewką - i segment tylny - znajdujący się za soczewką. Przedni odcinek zawiera rogówkę, ciecz wodnistą, tęczówkę, ciało rzęskowe i soczewkę; podczas gdy tylny segment zawiera ciało szkliste, siatkówkę, naczyniówkę i nerw wzrokowy. Przedni odcinek może być hodowany w celu badania patofizjologii zaburzeń oczu.
Aby wypreparować przedni odcinek z modelu zwierzęcego, zacznij od świeżo odizolowanego oka świni. Usunąć tkankę pozaoczodołową z oka i przemyć buforem uzupełnionym antybiotykiem. Umieść oko na sterylnej, nasączonej antybiotykami gazie, aby zapobiec zanieczyszczeniu oka.
Za pomocą skalpela naciąć oko w pobliżu równika, aby otworzyć powłokę korneoskorupową - warstwę włóknistą i naczyniową. Użyj zakrzywionych nożyczek, aby odizolować przedni odcinek od tylnej części oka. Ostrożnie odwróć przedni odcinek oka. Następnie zgarnij ciało szkliste i zdejmij soczewkę.
Wytnij tęczówkę promieniście w kierunku korzeni tęczówki, aby odsłonić siatkę beleczkową - pigmentowaną tkankę, przez którą ciecz wodnista spływa z oka. Usuń ślady ciała rzęskowego, pozostawiając cienki pasek tkanki. Przetrzyj rogówkę wilgotnym bawełnianym wacikiem, aby usunąć resztki pigmentu. Przedni odcinek oka może być teraz hodowany do dalszych eksperymentów.
Po usunięciu dodatkowych tkanek oczodołu i umyciu oczu antybiotykiem-antybiotykiem-PBS, w celu przeprowadzenia hemisekcji oka, umieść oko na gazie nasączonej antybiotykiem-antybiotykiem-PBS. Użyj sterylnej żyletki lub skalpela, aby wykonać nacięcie w pobliżu równika oka. Następnie wykonaj hemisekcję oka za pomocą zakrzywionych nożyczek chirurgicznych, aby wyizolować przednie oko.
Użyj mikronożyczek jako łopaty, aby zgarnąć ciało szkliste z przedniego odcinka i usuń soczewkę z przedniego odcinka za pomocą mikronożyczek. Stopniowo przycinaj tęczówkę do korzenia tęczówki promieniowo, aż będzie widoczna siatka beleczkowa. Rozciągnij cięcie o 360 stopni wokół tęczówki, aby odsłonić cały obszar siatki beleczkowej i w razie potrzeby wyczyść pozostałą tęczówkę pokrywającą siatkę beleczkową.
Przytnij resztki ciała rzęskowego za obszarem siatki beleczkowej, pozostawiając tylko 1-milimetrowy cienki pasek tkanki. Po umieszczeniu przedniego odcinka na szalce Petriego zwilż bawełniany wacik w podłożu i delikatnie wklep w środek rogówki, aby usunąć pigment. Przytrzymaj oczy kleszczami i usuń dodatkowy pigment wokół twardówki, wycierając.