JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:11 min. • July 8th, 2025
Zacznij od wstępnie zmontowanego ogniskowania izoelektrycznego, ogniwa IEF - jednostki elektroforezy w fazie ciekłej. Ta kolumna jest podzieloną na przedziały, poziomą porowatą komorą z wyraźnymi dodatnimi i ujemnymi końcami na końcach.
Teraz weźmy ekstrakt roślinny zawierający złożoną mieszaninę różnie naładowanych składników o różnych punktach izoelektrycznych, pI - pH, w którym ładunek netto cząsteczki wynosi zero.
Ekstrakt jest uzupełniany amfolilitami o zmiennych ładunkach, które ułatwiają późniejsze frakcjonowanie składników próbki.
Załaduj próbkę do portów ładowania kolumny. Obecnie kolumna IEF ma stałe pH. Następnie zastosuj wysokie napięcie, aby zainicjować elektroforezę.
Pod wpływem pola elektrycznego rozpuszczalne amfolity migrują w kierunku przeciwnie naładowanych elektrod i tworzą liniowy gradient pH w poprzek kolumny. Składniki próbki zaczynają migrować przez gradient pH fazy ciekłej, a te umieszczone przy pH poniżej ich pI mają ładunek dodatni netto.
Migrują one w kierunku elektrody ujemnej, dopóki komponenty nie osiągną swojego pI, gdzie ich ładunek neutralizuje się, a migracja ustaje. Podobnie, składniki o pH powyżej ich pI migrują w kierunku elektrody dodatniej i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych