Ilościowa spektroskopia NMR wodoru w komórce do monitorowania interakcji białko-ligand

Aby monitorować interakcje białek docelowych z małocząsteczkowymi ligandami testowymi w natywnym środowisku komórkowym, należy rozpocząć od probówki NMR wypełnionej buforem zawierającym czop żelowy u podstawy. Wstrzyknąć docelowe komórki wykazujące ekspresję białka, osadzone w agarozie, do probówki NMR, tworząc struktury przypominające nitki.

Załaduj rurkę do jednostki przepływowej bioreaktora, dostarczając pożywkę wzrostową w celu utrzymania żywotności komórek. Włóż jednostkę przepływu do przyrządu do magnetycznego rezonansu jądrowego lub NMR.

Pod wpływem silnego pola magnetycznego jądra atomowe atomów wodoru białek zostają namagnesowane i ustawiają się równolegle do pola, przystosowując się do stanu o niskiej energii.

Zastosuj impuls o częstotliwości radiowej, powodując ułożenie jąder w linii antyrównoległej do pola magnetycznego, co pozwala im przejść do stanów o wyższej energii.

Po krótkim impulsie jądra wracają do swojego pierwotnego położenia, emitując pochłoniętą energię. Detektor wychwytuje tę energię, generując widmo NMR reprezentujące częstotliwości rezonansowe atomu wodoru. Każdy pik widmowy odpowiada innemu atomowi wodoru w określonym środowisku elektronicznym.

Dodaj cz