JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:00 min. • July 8th, 2025
Komórki zrębu szpiku kostnego, BMSC - przodkowie linii tkanki szkieletowej - znajdują się w jamie szpiku kostnego wraz z heterogenną populacją komórek, w tym hematopoetycznymi komórkami macierzystymi, HSC i zróżnicowanymi komórkami krwi.
Aby wyizolować BMSC, zacznij od świeżo zebranej kości piszczelowej myszy. Przetnij bliższy i dalszy koniec kości, aby odsłonić jamę szpiku kostnego. Umieść przeciętą kość w przystosowanej probówce do mikrofuge zawierającej podłoże.
Wirować z dużą prędkością, aby wypłukać szpik kostny z kości i utworzyć osad szpiku kostnego na dnie probówki. Usuń kość z rurki. Za pomocą igły dołączonej do strzykawki rozdrobnić szpik kostny, aby rozbić grudki.
Dodaj podłoże do zawiesiny. Przefiltrować przez sitko do komórek o odpowiednim rozmiarze oczek, aby usunąć fragmenty kości. Umieścić przesącz zawierający komórki szpiku kostnego na plastikowej płytce hodowlanej.
Podczas inkubacji przez odpowiedni czas BMSC przylegają do dna plastikowej płytki hodowlanej i namnażają się, podczas gdy nieprzylegające komórki, w tym HSC, pozostają w zawiesinie.
Wyrzucić pożywkę zawierającą nieprzylegające komórki. Użyj trypsyny, aby odłączyć BMSC od płytki. Dodaj pożywkę zawierając
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych